Estratégia de purificação das proteínas α-lactoalbumina e β-lactoglobulina do soro de queijo - Zuñiga, Abraham Damian Giraldo (2003)
A extração líquido-líquido convencional, usando soluções aquosas e solventes orgânicos, não é adequada para separar compostos de origem biológica, como proteínas e células, pois a estabilidade destas é baixa em solventes orgânicos. Uma variante da extração líquido-líquido tradicional, compatível com os processos de biosseparações, é a partição em SAB, a qual vem sendo usada com sucesso no isolamento de proteínas e de outras biomoléculas. As técnicas cromatográficas destacam-se também na purificação de biomoléculas, pela sua elevada resolução. Neste trabalho foram utilizadas as técnicas de Cromatografia de Troca Iônica (CTI), Sistemas Aquosos Bifásicos (SAB) e Cromatografia por Exclusão Molecular (CEM) para desenvolver uma estratégia de purificação das proteínas do soro de queijo α- lactoalbumina (α-la) e β-lactoglobulina (β-lg). Na etapa de adsorção foi empregada a cromatografia de toca iônica com a resina Accell Plus QMA ®, ocorrendo uma adsorção seletiva das proteínas α-la e β-lg. Na etapa de pré- purificação das proteínas foi empregado um sistema aquoso bifásico composto por 18% de polietilenoglicol 1500 Da (PEG) + 18% de fosfato de potássio (FFP). Os coeficientes de partição das proteínas mostraram que a α-la migrou para a fase rica em PEG e a β-lg para a fase rica em FFP. Na etapa de polimento foi utilizada a cromatografia por exclusão molecular (CEM) para purificar as proteínas α-la e β-lg presentes, respectivamente, nas fases polimérica e salina do sistemas aquosos bifásicos compostos por PEG + água + FFP. As soluções aquosas provenientes da CEM, contendo α-la e β-lg foram então liofilizadas, obtendo-se uma pureza de 93% para α-la e 97% para β-lg, com rendimentos aproximados de 47% e 65% para α-la e β-lg, respectivamente. Por fim um estudo financeiro preliminar para a implantação de uma unidade de purificação destas proteínas apresentou um elevado grau de atratividade do projeto com uma taxa de retorno de capital (TRC) inferior a três anos e uma taxa interna de retorno (TIR) superior a 35%.