Efeito do resfriamento e da associação de crioprotetores, penetrantes, não penetrante e ácido ascórbico na qualidade de folículos pré-antrais bovinos vitrificados - Triana, Erly Luisana Carrascal (2012)
O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito do resfriamento e da associação de crioprotetores penetrantes e não penetrante acrescido de ácido ascórbico na qualidade de folículos pré-antrais (FOPAs) bovinos vitrificados. Para isso, foram realizados dois experimentos. No experimento I, foi estudada a morfologia dos FOPAs após resfriamento seguido de vitrificação. Ovários (n=10) foram coletados de cinco novilhas mestiças de 14 a 16 meses de idade. No laboratório, 22 fragmentos ovarianos foram retirados da região cortical, os quais foram distribuídos: dois para controle fresco (zero hora), sendo imediatamente fixados para análise histológica, e 20 fragmentos resfriados à 4 ºC por quatro e 24 horas em meio TCM-199+HEPES e antibióticos. Dos 20 fragmentos resfriados, quatro foram fixados como controle 4 e 24 horas (dois fragmentos cada) e os 16 restantes foram distribuídos em quatro tratamentos de vitrificação para cada tempo de resfriamento, respectivamente: Tratamentos V4a e V24a: TCM-199 + Etilenoglicol (EG) 1,5M + Dimetilsulfoxido (DMSO) 1,5M; Tratamentos V4b e V24b: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + sacarose (SAC) 0,5M; Tratamentos V4c e V24c: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + Ácido Ascórbico (AA) 0,1 mM/L e tratamentos V4d e V24d: TCM-199 + DMSO 1,5M + EG 1,5M + SAC 0,5M + AA 0,1mM/L. Após a vitrificação, os fragmentos permaneceram armazenados em Nitrogênio Líquido por três dias, e posteriormente aquecidos em soluções decrescentes de SAC e fixados para histologia clássica. No experimento II, foi estudada a viabilidade dos FOPAs após resfriamento seguido de vitrificação pela coloração Azul de Trypan (AT). Ovários bovinos (n=10) foram coletados, fragmentados e distribuídos nos quatros tratamentos conforme descrito no experimento I, os quais foram posteriormente submetidos ao isolamento folicular mecânico para análise da viabilidade. A variável morfologia foi avaliada pelo Teste SNK e a viabilidade foi analisada pelo teste Qui-quadrado com nível de significância de 5%, ou pelo Teste Exato de Fisher quando o número de repetições foi menor que 30 folículos. Não houve diferença na percentagem de folículos morfologicamente normais entre o grupo controle fresco e o grupo controle 4 h (99,3% e 96,0% respectivamente; P>0,05). Entretanto, houve redução da integridade morfológica dos FOPAs após 24 h de resfriamento (controle 24 h: 86%; P<0,05). Após a vitrificação, houve uma redução da integridade morfológica e viabilidade folicular em todos os tratamentos em relação aos controles resfriados (P<0,05). No entanto, o tratamento V4c manteve a viabilidade folicular semelhante ao controle 24 h (P > 0.05). Este mesmo tratamento (V4c) mostrou maior capacidade de preservação em relação aos demais tratamentos de vitrificação (P<0,05). Em conclusão, FOPAs inclusos no tecido ovariano bovino conservam a morfologia eficientemente quando são resfriados a 4 ºC por até quatro horas em meio TCM-199+HEPES+Antibióticos. Além disso, a associação dos agentes crioprotetores penetrantes DMSO / EG, com o agente antioxidante AA melhora as taxas de sobrevivência e mantêm a integridade morfológica durante a vitrificação.