Identificação de genes diferencialmente expressos na interação tomateiro - Alternaria solani - Scheuermann, Klaus Konrad (2006)
A pinta preta, causada pelo fungo Alternaria solani Sor. é considerada uma das mais importantes doenças da cultura do tomateiro provocando perdas que podem chegar a 80%. O desenvolvimento de cultivares resistentes a esta doença é dificultado pela natureza poligênica da resistência e ausência de fontes com altos níveis de resistência. Com o objetivo de identificar genes envolvidos na resposta de defesa do tomateiro à A. solani, foram construídas duas bibliotecas de cDNA a partir de mRNA isolado de folhas da linhagem NC EBR-2 coletadas 24 e 36 horas após a inoculação (hai), utilizando-se a técnica de hibridização subtrativa por supressão (SSH). Análise de 1303 ESTs revelou que 31% apresentam similaridade a genes relacionados com defesa da planta, regulação da expressão gênica e transdução de sinais. Entre os possíveis genes relacionados com a defesa, houve um predomínio de ESTs com similaridade a genes cuja resposta é regulada pelo etileno e ácido jasmônico, e em menor freqüência ESTs com similaridade a genes regulados pelo ácido salicílico. A análise de expressão gênica de 40 genes candidatos por PCR em tempo real (RT-qPCR) revelou que 16 deles (40%) são induzidos em resposta a A. solani. A indução da maioria desses genes tem início entre 6 e 12 hai atingindo uma máxima expressão entre 24 e 36 hai. Devido à resistência a pinta preta estar relacionada à idade fisiológica dos tecidos, comparou-se o nível de expressão dos genes induzidos em resposta ao fungo no dossel inferior (1a e 2a folhas) e superior (4a e 5afolhas) de plantas aos 45 dias após a semeadura. Verificou-se que os genes que codificam proteínas com similaridade a PR-1 básica P1-p14, β-1,3-endoglucanase básica, NtEIG-A1 (Nicotiana tabacum proteína A1), THT1-3 (hidroxicinamoil-CoA tiramina N- hidroxicinamoil transferase), POTLX-3 (lipoxigenase-3) e pSTH-2 (proteína PR STH-2) apresentaram maior nível de expressão no dossel superior onde se observa uma menor severidade da doença. Verificou-se ainda, que alguns desses genes como NtEIG-A1, apresentam também uma maior velocidade de resposta no dossel superior. O maior nível de expressão dos genes de defesa associado a uma maior velocidade de resposta, pode ser um dos fatores responsáveis pela menor severidade da pinta preta observada no dossel superior das plantas de tomateiro.