Purificação e identificação de proteína de Babesia bovis com atividade lectínica - Santos, Eliziária Cardoso dos (2011)
O presente estudo objetivou purificar e identificar uma proteína de merozoíto de B. bovis com atividade lectínica. Para tal, antígenos solúveis totais de merozoíto foram submetidos à cromatografia de afinidade em coluna de agarose fetuína imobilizada. A fração protéica adsorvida à resina e eluída com cloreto de sódio foi denominada Fetuin Binding Protein (FBP) B. bovis. A homogeneidade e a caracterização da FBP quanto à massa molecular foram avaliados por SDS-PAGE, que revelou uma banda protéica na altura de 27 kDa, a qual não apresentou glicosilações quando conjugada com Pro-Q Emerald 300 glycoprotein Stain. Para identificar a constituição da amostra, à banda correspondente à fração protéica foi recortado do gel, tratada quimicamente e teve seus aminoácidos internos sequenciados por Espectrometria de Massa. A análise da sequência evidenciou que o fragmento era referente à albumina sérica bovina de Bos taurus com relação massa carga (m/z) de 1567,726 no pico mais intenso e com um score de 62 e 98, 98% de confiabilidade. Uma fração da FBP-B. bovis foi ainda submetida a sequenciamento da região NH2-terminal por Degradação Automática de Edman, cuja análise no algoritmo BLAST, envolvendo todos os microorganismos, identificou a sequência como sendo parte de uma proteína putativa não caracterizada de Dappu pulex (pulga d água), com um E-value de 6,5, 90% de identidade, 90% de positividade e massa aproximada de 26,939 Kilodaltons. Considerando a mesma sequência, outra análise no BLAST, restrita aos organismos do filo apicomplexa, foi realizada tendo seus aminoácidos identificados dentro da sequência de uma proteína putativa de B. bovis conservada evolutivamente com um score total de 52,8, cobertura de 71% e E-value de 0,40. O fragmento protéico isolado foi ainda utilizado para imunizar camundongos BALB/c para a produção de anticorpos específicos que, após serem purificados por cromatografia de afinidade, foram titulados por Dot-Elisa e reconheceram a FBP-B. bovis até o título de 102.400. Desta forma, foi obtida uma proteína de merozoíto de B. bovis com atividade lectínica, com os aminoácidos internos pertencentes à proteína albumina sérica bovina e os aminoácidos da região NH2-terminal a uma proteína putativa de B. bovis que foi reconhecida por anticorpos específicos anti-FBP B. bovis. De acordo com os resultados apresentados, acredita-se que a proteína com atividade lectínica de merozoíto de B. bovis purificada possa ser um dos mediadores envolvidos na parasitemia dos eritrócitos. Em estudos futuros, se comprovada esta hipótese, ela pode abrir perspectivas para novos processos de intervenção terapêutica contra a Babesiose bovina e maior controle da doença.