Imunolocalização da Nucleosídeo Trifosfato Difosfohidrolase 1 (NTP Dase-1) de Trypanossoma cruzi - Cunha, Luana Celina Seraphim (2010)
Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado da Ordem Kinetoplastida, agente etiológico da Doença de Chagas. As ecto-nucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados nos seus produtos monofosfatados. Os nucleotídeos extracelulares são conhecidos como moléculas sinalizadoras envolvidas com vários processos celulares, incluindo a sinalização purinérgica relacionada à mediação da resposta imune de mamíferos. Mecanismos envolvidos na degradação dessas moléculas são importantes na infecção por T. cruzi e outros patógenos intracelulares. A Nucleosídio Trifosfato Difosfohidrolase 1 (NTPDase- 1) de T. cruzi é uma ecto-nucleotidase da família E-NTPDase, que hidroliza nucleotídios extracelulares, apontada como molécula importante para o processo infectivo in vitro e virulência do parasito em modelo murino. O presente trabalho se propôs a avaliar a Imunolocalização da (NTPDase-1) em três formas morfológicas da cepa Y do parasito T. cruzi. Produção e purificação de anticorpos anti NTPDase-1 recombinante de T. cruzi através de cromatografia de afinidade em resina de agarose acoplada a NTPDase1 recombinante purificada. Foram utilizados nos ensaios de especificidade por Western blot e na imunolocalização por microscopia confocal: soro policlonal anti-NTPDase1 de T. cruzi, anticorpos antiNTPDase-1 purificados e um anticorpo policlonal comercial anti CD39 de humano. A especificidade dos anticorpos e soro imune foram avalidas em extrato protéico de tripomastigotas e epimastigotas da cepa Y. A imunolocalização da NTPDase-1 foi avaliada nas três formas evolutivas do parasito, epimastigotas, amastigotas e tripomastigotas. Os anticorpos purificados demonstraram especificidade contra NTPDase-1 em extrato protéico de T. cruzi, não demonstrando reconhecimento cruzado com GDPase de L. major. Anticorpo anti CD39 de humano reconhece uma possível isoforma da NTPDase-1 de 46 kDa além da NTPDase-1 de 66 kDa em extrato protéico de epimastigota. Os parasitos foram marcados pelo anticorpo anti NTPDase-1 quanto pelo anti CD39 de humano no ensaio de microscopia. A NTPDase 1 está presente nas três formas do parasito, na forma infectiva tripomastigota, na forma proliferativa amastigota, quanto na forma não infectiva epimastigota.