hFSH, T4 e IGF-I no desenvolvimento in vitro de folículos pré- antrais caprinos - Caliman, Sanely Lourenço da Costa (2014)
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da T4, IGF-I e hFSH, isoladamente ou em associação, bem como o período de cultivo (1, 7, 14, 21 e 28 dias) sobre a sobrevivência, ativação e crescimento in vitro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos. Para a Fase I, II e III, um fragmento/folículo foi retirado para histologia clássica e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) constituindo o controle fresco. Em seguida, os demais fragmentos/folículos foram cultivados in situ (inclusos em fragmentos de tecido ovariano) por 1 e 7 dias (Fases I e II) e 1, 7, 14, 21 e 28 dias (Fase III), (a 39oC em estufa e 5% de CO2) em -MEM+ na ausência ou presença de diferentes concentrações de T4 (etapa 1), IGF-1 (etapa 2) e hFSH (etapa 3). Na Fase II, os fragmentos/folículos foram cultivados em placas contendo -MEM+ suplementado com T4, IGF-I e FSH, em associação nas melhores concentrações definidas na Fase I. Na Fase III, os fragmentos/folículos foram cultivados em -MEM+ ou no (s) melhor (es) meio (s) obtido (s) na Fase II por 1, 7, 14, 21 e 28 dias. Para os experimentos realizados na Fase I, os resultados mostraram que após sete dias de cultivo, 10 ng/mL de hFSH foi capaz de promover a ativação de folículos primordiais e manter a integridade ultraestrutural dos folículos cultivados por até sete dias. A adição de 100 ng/mL de IGF- I ao meio cultivo ativa os folículos em desenvolvimento com um dia de cultivo. Além disso, a utilização de 20 ng/mL de T4 é eficaz na manutenção da sobrevivência, ativação e crescimento de folículos, durante sete dias de cultivo. Na Fase II, a interação de T4, hFSH e IGF-I realizada durante o cultivo, demonstrou que a combinação de T4/hFSH (20/10ng/mL) é benéfica para o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais, durante a sobrevivência, o crescimento e aspectos ultraestruturais. Os resultados apresentados na Fase III demonstram que o cultivo de longa duração na concentração de 20/10 ng/mL de T4/hFSH promoveu a sobrevivência, a ativação de folículos primordiais e o crescimento folicular durante sete dias de cultivo. Os resultados deste estudo mostraram que a utilização de hFSH (10ng/mL), IGF-I (100ng/mL) e T4 (20ng/mL) promovem a manutenção da sobrevivência folicular e o desenvolvimento dos folículos xxpré-antrais caprinos e que a associação de T4 e hFSH assegurou a sobrevivência dos folículos e manteve o crescimento folicular. Os folículos cultivados por um período de longa duração (28 dias) se faz necessário para o conhecimento dos meios a serem utilizados durante o cultivo in vitro, demonstrando a necessidade de mais interações entre as substâncias, para a descoberta de um meio de cultivo que permita o desenvolvimento dos folículos durante a foliculogênese na fase pré-antral e antral.