Estudo “in vitro” da apoptose induzida em linfócitos de camundongos (BALB/c) imunizados com o peptídeo sintético SBm7462 - Sanchez, Irma Ximena Barbosa (2004)
Linfócitos T SBm7462-reativos provenientes de camundongos BALB/c de 12 semanas de idade, que receberam por via subcutânea, duas imunizações alternadas a cada 21 dias, com peptídeo sintético SBm7462, foram avaliados quanto ao desenvolvimento da morte celular induzida por ativação (AICD) após apresentação e reconhecimento do peptídeo. Para isto foram realizadas culturas de linfócitos do baço, coletados 9 e 15 dias após a primeira e segunda imunização, e re-estimulados com o peptídeo na presença de quatro drogas diferentes: cicloheximida, benzamida ribósido, ciclosporina A e mitramicina. A identificação de células apoptóticas se realizou através do método de coloração com laranja de acridina e o método imunihistoquímico de TUNEL. A natureza específica dos linfócitos T foi confirmada pela contagem após re-estimulação “in vitro” com o peptídeo sintético, a cada 48 horas durante dez dias de cultura. Diferenças foram observadas ao se comparar os valores de viabilidade obtidos pelo método de exclusão do corante azul de tripan com aqueles que foram constatados com os métodos de detecção da fragmentação do DNA, técnica de TUNEL e laranja de acridina. Embora a técnica de TUNEL seja um método imunohistoquímico, se deve considerar que a sua especificidade é maior quando ainda não ocorreu a completa degradação do DNA. Resultados vencontrados demonstraram que os linfócitos T SBm7462-reativos utilizados expressam constitutivamente a maquinaria necessária para indução de apoptose após ativação com o peptídeo sintético. Todos os achados sugerem que o processo de síntese de novo de proteínas não está envolvido na apoptose após sinalização do TCR, e que a apoptose foi mediada por uma via independente da calcineurina.