Determinação de fraude de Leite com soro de leite pela análise de CMP e Pseudo-CMP por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa com detecção por espectrometria de massa - Magalhães, Mirella Araújo (2008)
O objetivo principal desse trabalho foi o desenvolvimento de um método de análise laboratorial por cromatografia líquida de alta eficiência com Fase Reversa e detecção por Espectrometria de Massa para determinar a adulteração de leite com soro de leite através da detecção de caseinomacropeptídio (CMP), e determinar o efeito do cultivo do leite com Pseudomonas fluorescens para verificar a ocorrência de CMP ou pseudo-CMP produzido por enzimas termorresistentes de bactérias psicrotróficas. As amostras de leite foram adicionadas de soro de leite nas concentrações de 0; 5; 10; 15 e 20% (v/v) e analisadas por Cromatografia Liquida de Alta Eficiência Filtração Gélica (CLAE-FG) e Cromatografia Liquida de Alta Eficiência em Fase Reversa com detecção por Espectrometria de Massa (CLAE-FR/EM). Foi observado que houve diferença entre os métodos de análise (p<0,05) e houve efeito da concentração de soro de leite pelos dois métodos (p<0,05),ou seja, o aumento da concentração de soro acarreta um aumento da área correspondente ao CMP pelos dois métodos. O CMP foi detectado por CLAE-FG no tempo de retenção em torno de 5,7 minutos. Quando analisado por CLAE-FR/EM, o CMP foi detectado no tempo de retenção em torno de 19 minutos e caracterizado pelos íons de relação massa/ carga 1697,4+4 e 2263,3+3. As amostras de leite cultivadas com Pseudomonas fluorescens foram incubadas por diferentes dias (0, 2, 4, 6 e 8) a 7 ºC, adicionadas de diferentes concentrações de soro de leite (0; 5; 10; 15 e 20% (v/v)) e analisadas por CLAE-FG e CLAE-FR/EM. Nas amostras de leite adicionadas de Pseudomonas fluorescens e sem adição de soro de leite, analisadas por CLAE-FG, quando incubadas por até 2 dias, não foi verificado presença de CMP. Porém as amostras de leite incubadas por tempo acima de 2 dias foi verificada a presença de CMP, não proveniente da adulteração do leite com soro de leite. As mesmas amostras de leite adicionadas de Pseudomonas fluorescens e sem adição de soro, analisadas por CLAE-FR/EM, e incubadas por até 2 dias não apresentou aumento da área de detecção do CMP. Porém nas amostras de leite incubadas por tempo acima de 2 dias foi verificada a presença de CMP, caracterizado pelos íons de relação massa carga 1697,4+4 e 2263,3+3 e outros íons 1358+5, e o 1301,2+5. Estes últimos íons são oriundos da hidrólise da κ- caseína pelas enzimas termorresistentes de Pseudomonas fluorescens O método de análise por CLAE-FG não diferenciou o CMP proveniente do soro de leite, do CMP e/ou do pseudo- CMP produzido por proteases de P. fluorescens. A análise de CMP no leite por CLAE-FR/EM foi eficaz para detectar a adição de soro de leite ao leite sem proteólise. Além disso, quando o leite foi proteolizado por enzimas de P. fluorescens este método conseguiu indicar que houve proteólise. Porém, quando o leite estiver proteolisado por P. fluorescens, e estiver sido adicionado de soro, não tem como quantificar o CMP que foi produzido somente pela P. fluorescens e o que foi devido somente à adição de soro. Sendo assim, o resultado do Índice de CMP, como previsto na IN 69/2006, é um excelente indicador da intensidade de proteólise das proteínas do leite, ou então da adição fraudulenta do leite com soro de leite, quando analisado por CLAE-FR/EM, sendo um indicador eficiente da qualidade do leite.