Avaliação in vitro de sêmen criopreservado de bovino e sua correlação com fertilidade in vivo - Okano, Denise Silva (2015)
Um dos problemas mais importantes da indústria da inseminação artificial é a determinação do potencial de fertilidade do sêmen, pois, as metodologias convencionais utilizadas para avaliar a qualidade de sêmen não têm demonstrado boa correlação com fertilidade dos espermatozoides. Resultados de recentes estudos com sêmen congelado-descongelados quando submetidos a uma filtragem antes das avaliações espermáticas tem melhor correlação entre as características dos espermatozoides e a fertilidade in vivo. Além disso, a utilização de diferentes sondas fluorescentes nas análises do sêmen permitem avaliação ampla e individual dos espermatozoides, além de sua qualidade funcional, bioquímica e estrutural. Desde modo, o presente estudo teve como objetivo empregar diferentes testes complementares de avaliação espermática pré e pós-filtragem em solução coloidal de sêmen criopreservado e verificar sua correlação com a fertilidade in vivo. Foram utilizadas duas amostras (palhetas da mesma partida) de sêmen congelado de 18 touros doadores de sêmen, sendo 11 reprodutores da raça Nelore, cinco Composto Montana Tropical, um Senepol, e um Red Angus, escolhidos de acordo com os animais utilizados em programa de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF) imposto em um rebanho comercial. Os dados obtidos foram divididos de acordo com a fertilidade obtida após as inseminações, sendo fertilidade satisfatória (≥ 55 % de taxa de prenhez) e fertilidade insatisfatória (˂ 55 % de taxa de prenhez) Todas as fêmeas foram sincronizadas por uso de protocolos de sincronização e inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Os testes empregados para análise do sêmen foram motilidade e vigor espermático, análise quanto à integridade de membrana plasmática e acrossomal, produção de peróxido de hidrogênio intracelular, e organização da bicamada, por meio de sondas fluorescentes (IP, FITC-PSA, M540) empregando a Citômetria de fluxo. Houve efeito de touro sobre a taxa de prenhez (P<0,05) com máximo de 76 % (19/25) e mínimo de 15,6 % (5/32) sendo a média de 54,6 % (723/1325) de prenhez com uma inseminação. Quanto aos grupos de fertilidade houve diferença (P<0,05) entre as médias, sendo 62 % de prenhez para o grupo FERTILIDADE SATISFATÓRIA e 40,6 % para o grupo FERTILIDADE INSATISFATÓRIA. Na avaliação convencional do sêmen, o grupo de fertilidade satisfatória apresentou maior média de motilidade espermática progressiva retilínea (60,49%) que o grupo de fertilidade insatisfatória. Nas avaliações realizadas por citometria de fluxo, o grupo de fertilidade insatisfatória obteve maiores médias percentuais para populações celulares com membrana plasmática lesionada e membrana acrossomal intacta (7,18 %), para células com alto grau de peroxidação e lesão de membrana plasmática (25,5 %) e menor média percentual de populações celulares com membrana plasmática íntegra e estável (19,5 %) que diferiram (p<0,05) do grupo e fertilidade satisfatória. A centrifugação do sêmen em solução coloidal foi eficiente em reter as células com lesões na membrana plasmática e células com lesões na membrana acrossomal (16,8; 31,9 e 7,0 %); células com alta peroxidação intracelular (4,17; 64,3 e 15,0 %). Concluiu-se que as populações de espermatozóides com lesão na membrana acrossomal representam o maior percentual das células espermáticas em sêmen submetido ao processo de congelamento e relacionam-se com à alta taxa de fertilidade obtida em programa de inseminação artificial em tempo fixo (IATF); populações de espermatozóides com lesão de membrana plasmática e alta taxa de peroxidação intracelular estão relacionadas à baixa taxa de fertilidade em programas de inseminação artificial em tempo fixo (IATF); a seleção de espermatozoides com membranas acrossomal e espermática intactas é possível pela centrifugação associado ao uso de soluções coloidais (Androcoll®) e a avaliação da motilidade espermática progressiva retilina está relacionada a alta taxa de fertilidade em programa de inseminação artificial em tempo fixo.