Padrões de poliadenilação em moléculas de RNAs de Leishmania obtidas da análise de transcriptoma - Santos, Ramon de Freitas (2012)
Os sequenciamentos de próxima geração (NGS) em larga escala e de alto rendimento revelaram novos aspectos nos genomas e transcriptomas que não foram observados ou foram pobremente descritos usando sequenciamento em pequena escala. Usando duas espécies de Leishmania como modelo numa análise global do transcriptoma por pirosequenciamento (454/Roche) encontramos poliadenilações não canônicas em moléculas de rRNAs e mRNAs. Os RNAs em Leishmania são transcritos como longas moléculas policistrônicas pós-transcricionalmente processadas, mas usualmente somente o mRNA é poliadenilado estavelmente na sua extremidade 3 - madura. Analisando os dados de transcriptoma também observamos caudas poli(A)+ ou ricas em poli(A)+ na extremidade 3 dos genes de rRNA. Este fenômeno poderia estar diretamente relacionado com uma usual contaminação por rRNAs observada de modo geral nas amostras de mRNAs após purificação por afinidade à oligo(dT). Surpreendentemente, encontramos muitas caudas poli(A)+ homo- ou heteropoliméricas na extremidade 3 e internamente localizadas nos transcritos preditos (rRNA e mRNA) interrompendo a informação e provavelmente relacionadas com um mecanismo ainda não observado de controle pós-transcricional da expressão gênica em Leishmania. Comprovamos estas observações por RT-PCR e sequenciamento convencional usando os genes ribossomais SSU 18S, LSU 28S alfa e LSU 28S beta e mensageiros eiF5a2 e proteína 60S ribossomal como alvos experimentais. O fenômeno de adição de cauda poli(A)+ em moléculas truncadas expande as fronteiras do conhecimento a respeito da regulação da expressão gênica em Leishmania e organismos relacionados e sugere a presença de um controle póstranscricional baseado no turnover de RNAs. A presença de transcritos homólogos à proteínas componentes do exossoma de outros organismos foi também observada, sugerindo que esta maquinaria seja ativa em Leishmania. A integridade das moléculas transcritas pode ter um papel importante na regulação dos genes que efetivamente são traduzidos. Estes dados destacam a importância de avaliar estas modificações pós-transcricionais nas análises globais do transcriptoma e abrem SANTOS, R. F. Resumo novos campos de pesquisa nos estudos globais de expressão gênica diferencial em tripanosomatídeos.