Prospecção, isolamento e atividade antimicrobiana de peptídeos de folhas de Mikania sp. - Magalhães Junior, Marcos Jorge de (2009)
Peptídeos antimicrobianos (AMPs) têm atraído a atenção de pesquisadores como pontenciais compostos de defesa para serem usados no agronegócio. O objetivo deste trabalho foi, por técnicas proteômicas, bioprospectar o potencial antimicrobiano de frações enriquecidas em peptídeos de folhas de guaco (Mikania sp.) contra fitopatógenos de importância comercial, visando aplicação biotecnológica. Folhas frescas de guaco foram maceradas em tampão Tris acrescido de inibidores de proteases, o homogenato foi centrifugado, e o sobrenadante foi nomeado extrato solúvel (ES). O precipitado foi ressuspendido em solução de LiCl contendo inibidores de proteases, o homogenato foi centrifugado e o sobrenadante foi denominado extrato de parede celular (EP). ES e EP foram fracionados por ultrafiltração em membranas com limite de exclusão de 3 e 30 kDa. Para avaliar o potencial antimicrobiano das frações protéicas de guaco, as frações ultrafiltradas ES>30kDa, ES3-30kDa, EP>30kDA e EP3-30kDa foram testadas contra cinco bactérias, Ralstonia solanacearum, Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, Erwinia caratovora subsp. caratovora e Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, e o fungo Fusarium oxysporum. O ES>30kDa inibiu o crescimento de todos os seis microrganismos testados. Os microrganimos mais susceptveis às fraçoes protéicas foram a bactéria Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis e o fungo Fusarium oxysporum. O procedimento de ultrafiltração foi essencial para a recuperação de grande quantidade de amostra parcialmente fracionada enriquecida em peptídeos. Com o objetivo inicial de confirmar a presença de AMPs nas frações ultrafiltradas, os extratos de guaco foram separados em SDSTricina-Page e as bandas de massa molecular sugestivamente enriquecidas em AMPs foram eletroeluídas e analisadas por espectrometria de massa em MALDITOF/ TOF. Com o mesmo objetivo, as frações ultrafiltradas foram separadas em C18-RP-HPLC e os picos analisados por espectrometria de massa, quando foram detectadas diversas moléculas com massas moleculares entre 4.367,092 e 9.164,098 kDa. Os picos com massas moleculares semelhantes aos AMPs foram selecionados e estão sendo submetidos à proteólise limitada para a caracterização bioquímica dos peptídeos via peptide mass fingerprint e/ou, MS/MS. Estes extratos protéicos ou peptídicos, com atividade antimicrobiana, podem ser biotecnologicamente explorados para aplicação comercial como compostos de defesa.