Caracterização do perfil de resistência a antibióticos de isolados de Salmonella enterica obtidos na cadeia produtiva de aves - Grossi, Juliana Líbero (2021)
Caracterização do perfil de resistência a antibióticos de isolados de Salmonella enterica obtidos na cadeia produtiva de aves. Orientador: Luís Augusto Nero. Alimentos de origem animal são importantes fontes de disseminação de micro-organismos resistentes a antibióticos, um desafio global que deve ser gerenciado considerando uma abordagem em Saúde Única. A cadeia produtiva de aves, em especial, contribui de maneira relevante para esse problema, com destaque para Salmonella enterica devido a sua patogenicidade, prevalência e emergência de cepas resistentes a antibióticos. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil de resistência de isolados de S. enterica obtidos em uma cadeia produtiva de aves. O estudo foi dividido em duas fases: 1) determinação dos perfis fenotípicos e genotípicos de resistência e 2) avaliação da atividade de bombas de efluxo dos isolados considerados multidroga-resistentes (MDR). Isolados de S. enterica (n = 96) foram selecionados de um estudo prévio de caracterização da distribuição desse patógeno em uma cadeia produtiva de aves, e submetidos a caracterização da resistência fenotípica pelo teste de diluição em caldo e determinação da concentração inibitória mínima (MIC) de 11 antibióticos e da associação trimetoprim-sulfametoxazole. Ainda, os isolados foram avaliados quanto a presença de 21 genes associados a resistência pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Isolados com resultados positivos para gyrA, gyrB parC e parE (associados a resistência a ciprofloxacina) foram submetidos a High Resolution Melting (HRM) para detecção de mutações e os produtos de amplificação foram posteriormente sequenciados para caracterizar as mutações identificadas. A atividade de bombas de efluxo foi mensurada pela avaliação em ágar da exportação de brometo de etídeo (BrEt). Os principais fenótipos de resistência encontrados foram à estreptomicina (n = 33, 34,4%), ampicilina (n = 11, 11,4%) e cefoxitina (n = 6, 6,3%). Ciprofloxacina apresentou um perfil intermediário de resistência em que 94 (97,9%) isolados apresentaram MIC ≥ 0,0125 μg/mL. Dentre os genes pesquisados, 51 (53,1%) isolados apresentaram aphAe 94 (97,9%) qnrB. aphAfoi detectado nos isolados resistentes à kanamicina e qnrB foi observado somente nos isolados com MIC ≥ 0,0125 μg/mL para ciprofloxacina. Entre os isolados que apresentaram resultados positivos para gyrA (n = 94, 97,9%), gyrB (n = 96, 100%), parC (n = 95, 99%) e parE (n = 96, 100%), variações por HRM foram detectadas e foram selecionados sequências de gyrA, gyrB e parC para sequenciamento. Não foram detectadas mutações nas sequências de gyrA, os amplicons de gyrB apresentaram mutações silenciosas e os três amplicons de parC apresentaram a mutação Thr57Ser. Seis isolados caracterizados como MDR foram selecionados e quatro deles apresentaram atividade de bomba efluxo na concentração 0,4 mg/L de BrEt; na concentração de 0,8 mg/L não foi detectada atividade de bomba efluxo em nenhum dos isolados. Os resultados deste estudo evidenciam a redução da susceptibilidade de S. enterica à ciprofloxacina, associada à distribuição de qnrB e de mutação em parC, sendo um alerta preocupante, visto a importância desse antibiótico para a saúde humana. A atividade de bombas de efluxo multidroga foi caracterizada em alguns isolados MDR, o que ressalta a importância desse mecanismo como uma alternativa para o desenvolvimento de resistência a antibióticos por Salmonella. Palavras-chave: Salmonella. Resistência a antibióticos. Ciprofloxacina. Bombas de efluxo.