Caracterização de vesículas extracelulares produzidas por Actinobacillus pleuropneumoniae em resposta a diferentes condições de estresse - Guidini, Matheus Machado (2024)
A família Pasteurellaceae engloba diversas espécies de bactérias Gram-negativas, algumas das quais são patogênicas para humanos e animais de produção. Membros dessa família são responsáveis por doenças que causam impacto econômico significativo na indústria suinícola, resultando em desafios consideráveis e altos custos associados ao uso de antimicrobianos. Essas bactérias frequentemente manifestam resistência a múltiplas drogas, o que dificulta ainda mais o tratamento. Entre as principais enfermidades na cadeia suinícola, a pleuropneumonia suína (PPS) destaca-se como uma das mais comuns. Actinobacillus pleuropneumoniae (App) é uma bactéria Gram-negativa, anaeróbia facultativa, pertencente à família Pasteurellaceae, sendo o agente etiológico da pleuropneumonia suína. Esta bactéria possui diversos fatores de virulência, como cápsula, lipopolissacarídeo (LPS), produção de sideróforos para captação de ferro e toxinas Apx. Além disso, é capaz de produzir vesículas extracelulares (VEs). Estudos anteriores destacaram a importância das VEs como um fator de virulência para App, mas ainda faltam informações sobre as condições que induzem a produção de VEs, bem como a transferência de material genético carregado por essas vesículas. Portanto, os objetivos deste trabalho foram investigar a vesiculação por A. pleuropneumoniae MV780, sorotipo 8, sob diferentes condições de estresse, e determinar se as VEs produzidas transportam material genético, um novo mecanismo de transferência horizontal de genes para App. As VEs de App foram obtidas em diferentes fases do crescimento bacteriano e em diferentes condições de estresse: por privação de ferro e na presença de antimicrobianos no meio de cultivo. Posteriormente, foram realizados testes de vesidução para verificar a capacidade de transferência de material genético por VEs de App. As vesículas foram investigadas quanto ao tamanho e dispersão, morfologia, conteúdo proteico e quantificação. Por fim, realizamos análises moleculares para detecção de marcadores moleculares que indicam a presença do plasmídeo p780 nas VEs produzidas e o possível potencial de transferência para outros isolados de App por vesidução. Nossos resultados indicaram que as vesículas produzidas por App não apresentam diferenças significativas quanto à morfologia; porém, tamanho e dispersão variaram nas diferentes fases de crescimento e emdiferentes condições de estresse. Nossos dados indicam que tanto a fase de crescimento quanto as condições de estresse influenciam diversos aspectos da produção de VEs, incluindo quantidade e perfil proteico. Evidenciamos que App produz mais VEs em condições de estresse, independentemente das fases de crescimento. As VEs produzidas apresentam material genético intracelular protegido da ação de nucleases, e o plasmídeo p780 é empacotado por VEs nas diferentes condições estudadas. Demonstramos o potencial de transferência deste plasmídeo para outro isolado de App, comprovando assim que App possui a capacidade de transferência de material genético carreado por vesículas extracelulares. Este trabalho é pioneiro na produção e caracterização de VEs em condições de privação de ferro e na presença de agentes antimicrobianos no meio de cultivo. Além disso, demonstramos pela primeira vez para a espécie a transferência de material genético por vesidução em App. Palavras-chave: Pasteurellaceae. Actinobacillus pleuropneumoniae. Vesículas Extracelulares. Vesiculação. Vesidução