Clonagem e caracterização dos genes que codificam endo-xilogalacturonana hidrolase, o fator de transcrição PacC e a proteína PalA em Crinipellis perniciosa, agente causal da vassoura-de-bruxa em Theobroma cacao - Silva, Gilvan Ferreira da (2007)
Crinipellis perniciosa é o agente causal da vassoura-de-bruxa no cacaueiro, e em outras espécies do gênero Theobroma, causando danos na cultura do cacau e cupuaçu com grande impacto econômico. Neste trabalho, descrevem-se o isolamento e a caracterização dos genes que codificam endoxilogalacturonana hidrolase (Xgh), PalA e PacC. O gene xghCp possui uma região codificadora de 1.251 pares de bases, interrompida por quatro possíveis íntrons. A proteína deduzida apresenta 417 aminoácidos, sendo codificada por um gene cópia única. A transcrição do gene foi analisada por meio da técnica de RT-PCR, sendo avaliados os efeitos do pH e das fontes de carbono glicose e pectina. A transcrição do gene não foi reprimida por glicose 1%. Em presença de pectina os transcritos do gene xghCp foram detectados em pHs variando de 4,0 a 8,0. Na análise filogenética da proteína deduzida, XghCp agrupou-se com endo-xilogalacturonana hidrolase de Aspergillus tubingensis, Aspergillus niger e duas enzimas similares a Xgh de Aspergillus fumigatus. O alinhamento múltiplo revelou que XghCp apresenta, na região correspondente ao sítio de ligação ao substrato de poligalacturonase, a seqüência GIK (Gy-Ile-Lys) que foi comum a todas as endo-xilogalacturonanas hidrolase analisadas. Este é o primeiro relato de endo-xilogalacturonana hidrolase em basidiomiceto. Neste trabalho também foi realizada a clonagem e caracterização dos genes palA e pacC, relacionados à transdução de sinal em resposta ao pH em C. perniciosa. A transcrição do gene palACp não é regulada por pH e a proteína deduzida apresentou o domínio conservado BRO1. A análise filogenética mostrou que esta proteína é conservada de fungos a humanos. Foram seqüenciados 4.347 pb correspondentes ao gene pacCCp, que apresentou uma ORF de 2.472 pb interrompida por 8 íntrons putativos. Na região promotora, foram localizados três possíveis sítios de reconhecimento para PacCCp (5 GCCAG3 ), o que sugere um sistema de auto-indução deste gene em pH alcalino. Os transcritos do gene pacCCp foram detectados por RT-PCR em pH 6,8 e 8,0 em 8, 18 e 32 horas após a indução. Em pH 4,0, foi observada a transcrição basal no período de 8 a 32 horas. A seqüência deduzida apresentou 824 aminoácidos, com domínios dedos de zinco extremamente conservados em leveduras e fungos filamentosos. Motivos de reconhecimento proteína-proteína YPXL/I de interação com PalA foram localizados na região C-terminal da proteína PacCCp entre os aminoácidos 637 e 742. A identificação dos genes pacC e palA sugere que C. perniciosa, apresenta a cascata de sinalização em resposta ao pH.