Efeito do silenciamento dos genes DnaJ e TCTP na infecção de tomateiro e Nicotiana benthamiana pelo potyvírus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) - Xavier, André da Silva (2012)
Durante a coevolução, os vírus de plantas desenvolveram a capacidade de modular a expressão de alguns genes do hospedeiro, ou alterar a função cognata de proteínas para obter sucesso em sua multiplicação e perpetuação. Essas alterações induzidas pelos vírus podem culminar em elevados níveis de especialização, tornando o vínculo com seus hospedeiros indissociável. O objetivo deste trabalho foi investigar a contribuição de uma DnaJ de Nicotiana benthamiana homóloga de tomateiro e da proteína TCTP de tomateiro durante a infecção pelo potyvírus PepYMV. Esses dois genes foram identificados como diferencialmente expressos em uma biblioteca de cDNA construída a partir de tomateiro infectado pelo PepYMV. Estudos de cinética de expressão do gene DnaJ em N. benthamiana infectadas pelo PepYMV demonstraram que a indução do gene ocorre 72 horas pós-inoculação (hpi) e aos 14 dias pós-inoculação (dpi). Plantas de N. benthamiana silenciadas para DnaJ por meio de VIGS e de tomateiro cv. Moneymaker silenciadas por transgenia para o gene TCTP foram obtidas e inoculadas mecanicamente com o PepYMV. A infecção viral foi confirmada por ELISA e a carga viral determinada por qRT-PCR. O silenciamento do gene DnaJ em N. benthamiana interferiu nos estágios iniciais da infecção viral (72 hpi), porém seu efeito em infecções já estabelecidas (14dpi) foi inconclusivo. Plantas não-transformadas de tomateiro exibiram sintomas severos da doença, enquanto as plantas transgênicas silenciadas para o gene TCTP apresentaram sintomas muito atenuados ou permaneceram assintomáticas. Nas plantas silenciadas a carga viral foi drasticamente reduzida. A localização subcelular de TCTP fusionada à proteína GFP em plantas de N. benthamiana sadias ou infectadas pelo PepYMV foi analisada por microscopia confocal. Em plantas sadias a localização de TCTP foi nuclear e citoplasmática, porém em plantas infectadas aos 14dpi, a localização de TCTP foi exclusivamente citoplasmática. Os resultados obtidos sugerem que tanto TCTP quanto DnaJ são proteínas que regulam positivamente o ciclo de infecção do PepYMV, sendo necessárias para o desenvolvimento da doença no caso de TCTP, ou para o rápido estabelecimento da infecção no caso de DnaJ. Estudos posteriores devem ser conduzidos afim de descobrir o mecanismo pelo qual esses fatores do hospedeiro são utilizados em benefício da infecção viral.