Caracterização e Imunolocalização das Principais Enzimas Digestivas do Predador Podisus nigrispinus (Heteroptera: Pentatomidae) - Fialho, Maria do Carmo Queiroz (2010)
Considerando a importância do predador Podisus nigrispinus em programas de controle biológico de pragas e a escassez de estudos sobre as enzimas digestivas deste inseto, este trabalho teve como objetivo identificar, caracterizar e localizar as principais enzimas digestivas das glândulas salivares e do intestino médio de P. nigrispinus. Machos adultos de P. nigrispinus foram dissecados sendo as glândulas salivares e o intestino médio (dividido em anterior, médio e posterior) submetidas a testes enzimáticos para amilase, aminopeptidase, catepsina L, tripsina e α-glicosidase. Estas enzimas foram pré-purificadas e imunolocalizadas na região do intestino médio. O pH da glândula salivar foi 6,0 e do intestino médio foi de 5,6 na região anterior, 5,7 na mediana e 5,8 na posterior. A atividade específica das enzimas nas glândulas salivares e no intestino médio foi respectivamente: amilase 0,01, 21 mU/mg, aminopeptidase 0,19, 3 mU/mg, catepsina L 16, 3800 U/mg e α-glicosidase 0,27, 147 mU/mg de proteína. Tripsina não apresentou atividade no intestino médio, porém na glândula salivar sua atividade específica foi de 7 U/mg de proteína. Catepsina L foi a principal proteinase encontrada em P. nigrispinus e apresentou dois picos de atividade com pH ótimo 5,5 e massa molecular de 14 e 17 e Km de 32 e 11 μM.. Amilase, aminopeptidase, α-glicosidase apresentaram um pH ótimo de 5,1, 5,5, 5,8; Km de 0,1%, 0,03, 5 mM e massa molecular de 43, 125 e 90 respectivamente. Insetos alimentados há uma hora apresentaram diferenças na atividade enzimática de todas as enzimas analisadas e se manteve similar nos outros tempos. Os dados bioquímicos e da imunolocalização mostraram que a amilase, aminopeptidase e α-glicosidase de membrana foram as enzimas mais ativas na região anterior do intestino; já nas regiões mediana e posterior todas as enzimas estão ativas, porém com uma maior atividade de catepsina L e α-glicosidase solúvel. Estes dados mostram que a digestão inicial de carboidratos inicia na região anterior do intestino médio e termina na anterior e mediana. Já a digestão de proteínas tem o início na região mediana e termina na anterior do intestino médio, sugerindo que a membrana perimicrovilar nestes insetos tem um papel na compartimentação da digestão, na qual a anterior está relacionada à absorção de água e também na absorção de aminoácidos obtidos do xilema por esses insetos zoofitófagos.