Caracterização do locus Fhos e sua participação na morte celular programada do intestino médio larval de Drosophila melanogaster - BENZE JÚNIOR, Roosevelt Antonio (2014)
Nos metazoários a morte celular fisiológica ou programada (MCP), nas suas diferentes formas, apoptótica, autofágica ou necrótica desempenha papel central na manutenção da homeostase. Várias doenças estão correlacionadas às disfunções da regulação da MCP, dentre elas podemos destacar doenças degenerativas, autoimunes e o câncer. Vários componentes da maquinaria da MCP foram conservados evolutivamente e apresentam grande semelhança mesmo entre organismos tão distintos quanto os insetos e seres humanos. Estas semelhanças, juntamente com a grande variedade de ferramentas experimentais disponíveis tornam a Drosophila melanogaster um modelo poderoso para a caracterização de novas funções gênicas relacionadas à MCP. Nosso grupo tem utilizado a MCP das glândulas salivares larvais como modelo experimental para o estudo de processos de morte celular fisiológicos durante o desenvolvimento de Drosophila. A MCP das glândulas salivares larvais é regulada pela ecdisona (hormônio esteróide). Embora a cascata de ativação transcricional induzida por ecdisona seja conhecida, em última instância, como esse sinal sistêmico (ecdisona), presente na hemolinfa do inseto, promove respostas estágio e tecido específicas ainda é pouco conhecido. Para responder essa pergunta, realizamos um “screen” genético com o intuito de identificar novos genes associados, à regulação ou execução da MCP de glândulas salivares. Neste “screening” identificamos uma mutação mapeada no locus Fhos que causa um fenótipo defectivo de MCP, a persistência de glândulas salivares larvais. A caracterização genética desse locus demonstrou que sua função é essencial para a ocorrência da MCP de glândulas salivares. O locus Fhos codifica proteínas com alta similaridade à família de proteínas forminas as quais participam do remodelamento dinâmico do citoesqueleto em diferentes processos biológicos. Neste trabalho, realizamos análises transcricionais e in silico de uma das isoformas codificadas pelo locus Fhos, a isoforma Fhos-C, as quais revelaram ser esta fruto de uma fusão gênica entre Fhos e um gene flanqueador denominado “desert”. A análise transcricional de Fhos-C revelou que este transcrito é diferencialmente expresso e geralmente em baixos níveis. Iniciamos análises funcionais do locus Fhos através da utilização de linhagens transgênicas na tentativa de avaliar a potencial função deste locus na MCP do intestino larval o qual e também eliminado por MCP durante o desenvolvimento pupal. Após determinar o perfil de transcrição da isoforma biologicamente ativa (Fhos-B) na MCP do intestino larval foram realizados ensaios de superexpressão e de knockdown desta isoforma. Em conjunto nossos dados mostram que a isoforma Fhos-C, parece não participar da MCP durante a metamorfose do inseto. A indução da expressão ectópica e o “knockdown” tecido específico da isoforma Fhos-B não produziu fenótipo evidente quanto aquele observado na MCP de glândulas salivares.