Avaliação de dois diferentes protocolos de maturação de células dendríticas no perfil de ativação e migração celular - PEIXOTO, Ana Paula (2022)
INTRODUÇÃO: De papel indispensável, as células dendríticas, importantes apresentadoras de antígeno com heterogeneidade fenotípica e funcional, ligam as respostas imunes inatas e adaptativas. São responsáveis pela regulação e modulação de respostas efetoras contra microrganismos e células tumorais, também realizam a manutenção da tolerância imunológica em condições homeostáticas. Sua plasticidade funciona de acordo com estímulos e microambiente em que estão inseridas. A imunoterapia utilizando essas células, está em constante estudo para a obtenção de ativação suficiente de uma resposta imune celular. Vários protocolos e patentes foram e ainda são testados para diferenciação e maturação de um perfil apropriado de células dendríticas para uma imunoterapia eficaz. OBJETIVO: Testar o perfil de ativação e migração apresentado pela cultura de células dendríticas submetida a maturação por diferentes protocolos de estímulos (TNF-α e TNF-α, IL-12 e CCL5) em ensaio in vitro. METODOLOGIA: Sangue periférico de voluntários saudáveis (n=10) foi utilizado para o isolamento de monócitos e linfócitos. As células aderentes foram diferenciadas em células dendríticas que foram submetidas a maturação por 2 diferentes protocolos (protocolo 1 com estímulo de TNF-α; protocolo 2 referente a estimulação com TNF-α, IL-12 e CCL5) e posteriormente co-cultura com células não aderentes. Para a caracterização do perfil fenotípico das células totais (aderentes e não aderentes), foi analisada a intensidade média de fluorescência de marcadores de superfície (CD209, CD11c, HLA-DR, CD123, CD209, CD80, CD86, CD83, CD3, CD8, CD4, CD25, FOX-P3, NKG2D e CD54) e citocinas (granzimas, perforinas, IL-10, IFN γ, TNF-α, IL-12, TGF-β, IL-4 e IL-17), por citometria de fluxo. A migração das células dendríticas maturadas foi vista sobre coloração e contagem de células em membrana de poliestireno submetidas a cultura com um gradiente quimiotático (MCP-1 e CCL5). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados mostram aumentos significativos na expressão de moléculas de adesão/co-estimulatórias CD209, CD11c, HLA-DR, CD123, CD80, CD86, CD83 e citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-12, IL-10 e TGF-β) das células dendríticas do protocolo 2 comparado com o protocolo 1. De tal forma, vemos a ativação de subtipos importantes de células T (Th1 e Th17, com redução de Treg) e Natural Killer (NK) produtoras de IFN-γ, com expressão diminuída de IL-10 no mesmo protocolo. CONCLUSÃO: Nossos estudos indicam que o protocolo de estimulação com TNF-α, IL-12 e CCL5 foi capaz de gerar um perfil de células dendríticas maduras e eficazes para ativação de subtipos balanceados de linfócitos T e células NK, importantes na resposta imune antitumoral.