O tratamento com TKI-258 aumenta a sinalização RhoA/ROCKs e leva ao aumento de apoptose em carcinoma epidermoide oral in vitro - CARNEIRO, Anna Cecília Dias Maciel (2020)
Introdução: Recentemente terapias para carcinoma epidermoide oral tendo alvo para vias de sinalização moleculares são as mais utilizadas. TKI-258 é um inibidor simultâneo dos receptores tirosina quinase FGFRs, VEGFRs e PDGFRs. Essas vias de sinalização ativam proteínas, como as GTPases Rho que contriubem para a tumorigênese, atuando em diferentes processos biológicos, como apoptose. Objetivos: Este estudo avaliou o efeito do tratamento com TKI-258 sobre a apoptose, envolvendo as GTPases Rho e suas efetoras ROCKs e PAKs em células SCC-4 de carcinoma epidermoide oral. Material e Métodos: Marcadores de morte celular e apoptose foram analisados em células SCC-4 controle e tratadas com TKI-258 por citometria de fluxo. O envolvimento das GTPases Rho e das efetoras ROCKs na indução da apoptose pelo TKI-258 foi avaliado por meio da quantificação de PARP clivada. Também foram realizadas análises de expressão gênica das GTPases Rho e de algumas de suas efetoras. Resultados: O tratamento com TKI-258 levou a um aumento significativo na morte celular (7-AAD) e apoptose (Anexina V e PARP clivado). Quando as GTPases Rho foram estimuladas com LPA e inibidas com Toxina Clostridium difficile, o percentual de células apoptóticas aumentou e diminuiu, respectivamente. O tratamento com TKI-258 combinado com LPA e Toxina A teve um efeito similar, aumentando e diminuindo a apoptose, respectivamente. O tratamento com TKI-258 aumentou significativamente a expressão gênica de RhoA, enquanto que em RhoB, RhoC, Rac1 e Cdc42 diminui significativamente. Os inibidores de ROCKs (Y-27632 e HA-1077) reduziram a apoptose comparado com o controle. TKI-258 combinado com Y-27632 ou HA-1077 levou ao aumento da apoptose em comparação apenas com os inibidores. O tratamento com TKI-258 levou a um aumento na expressão dos genes ROCK1 e ROCK2 e uma diminuição na expressão dos genes PAK1 e PAK2. Conclusão: O TKI-258 estimulou a apoptose em células SCC-4 de carcinoma epidermoide oral. Possivelmente, GTPases Rho e suas efetoras ROCKs participam da via de sinalização inibida pelo TKI-258. Terapias com inibidores multialvos, como o TKI-258, podem ser alternativas promissoras para o tratamento clínico do carcinoma epidermoide oral.