Avaliação da expressão de pigment epithelium-derived factor (PEDF) em ratos submetidos à hipóxia intermitente - Julian, Guilherme Silva [UNIFESP] (2014)
A apneia obstrutiva do sono (AOS) e caracterizada principalmente por hipoxia intermitente noturna, sendo relacionada com diversas complicacoes e patologias. O modelo de hipoxia intermitente (HI) cronica em roedores e um dos modelos animais mais utilizados para estudo da AOS e, assim como a AOS, causa diversas consequencias como declinio cognitivo e prejuizos neuronais. Pigment-Epithelium Derived Factor (PEDF) e descrito como um fator sensivel a hipoxia, com as atividades neurotrofica, neuroprotetora e anti-angiogenica. O presente estudo teve como objetivo avaliar aprendizado e memoria espacial e as expressoes genica e proteica de PEDF no SNC e no ventriculo esquerdo de ratos submetidos a HI, assim como avaliar os efeitos do retorno a normoxia, apos seis semanas de hipoxia. Alem de avaliar possiveis interacoes de PEDF e enzimas angiogenicas in vitro. Ratos machos Wistar foram submetidos a protocolos de HI (21 a 5% de concentracao de O2, com ciclos de 6 minutos) por seis semanas (grupo HI), e seis semanas de HI seguidas de duas semanas de recuperacao em normoxia (grupo Rb), ambos comparados com grupo controle (CTL). Em seguida, foram realizadas analises de aprendizado e memoria por Labirinto Aquatico de Morris, estabilidade de genes de referencia em diferentes estruturas cerebrais, expressoes genica e proteica de PEDF no hipotalamo, hipocampo e cortices frontal e temporal, alem do ventriculo esquerdo cardiaco. Alem disso, o estudo da interacao de calicreinas com PEDF e com seu fragmento peptidico 388-393 foi realizado atraves da incubacao das enzimas recombinantes com PEDF e seu fragmento 388-393, a atividade foi avaliada utilizando substratos fluorogenicos com supressao interna da fluorescencia. Com excecao de 18S, todos os genes de referencia avaliados se apresentaram estaveis aos protocolos de HI, porem, a classificacao dos genes se apresentou estrutura-dependente. Embora os modelos de HI nao tenham afetado memoria e aprendizado, a expressao genica de PEDF se apresentou aumentada seletivamente no cortex temporal dos grupos HI e Rb. Por outro lado, a expressao proteica de PEDF se manteve inalterada em todas as estruturas estudadas, assim como a expressao genica em hipotalamo, hipocampo, cortex frontal e ventriculo esquerdo. A incubacao realizada in vitro demonstrou que PEDF e seu fragmento peptidico aparentemente nao apresentam nenhuma interacao com as calicreinas tissular e plasmatica. O presente estudo demonstrou que os protocolos de HI afetam a estabilidade de genes de referencia, de maneira estrutura-dependente, no cerebro. Por outro lado, o protocolo de HI nao afetou os processos de aprendizado e memoria espacial, mas afetou a expressao de PEDF no cortex temporal, seletivamente no nivel transcripcional. Alem disso, nao ha indicacoes de que o mecanismo anti-angiogenico de PEDF envolva sua interacao com as calicreinas tissular e plasmatica