Caracterização e purificação de compostos do extrato de Passiflora edulis: estudo do efeito na coagulação sanguínea - Sato, Ana Claudia [UNIFESP] (2010)
Popularmente conhecido pelas suas propriedades sedativas e calmantes, 0 Passiflora edulis Sims f. flavicarpa e pertencente da familia Passifloraceae e originário das regiões tropicais das. Américas. Com base em um caso de incogulabilidade associado ao consumo excessivo do suco do maracuja (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa) em paciente anticoagulado com varfarina, foi proposto investigar a presença de inibidores da coagulação in vitro no extrato de Passiflora edulis Sims f. flavicarpa. Os estudos iniciais mostraram a presença de dois compostos de massas moleculares e ação inibitória distintas, a de prolongar a coagulação e a de inibir tripsina. o isolamento das atividades consistiu de extração, precipitação com acetona 1:5 (v/v) e cromatografia de exclusão molecular em Sephadex G-25, permitindo a separação dos compostos ativos.O inibidor de tripsina, após cromatografia de afinidade em tripsina-Sepharose e fase reversa (HPLC) em coluna /l-Bondapack C18, teve a região N-terminal sequenciada. A busca de similaridade no banco de dados de proteínas mostrou identidade com inibidores da família Bowman-Birk, grupo II, sendo nomeado de PeTI-112. Esse inibidor de aproximadamente 14.000 Da, age sobre a tripsina com constante de inibição de 0,2 nM . 0 PeTI-J12 e muito específico, pois não inibe outras serino proteinases como a calicreína plasmática humana, 0 fator Xa e a elastase. Em relação ao composto ativo sobre a coagulação, além do TTPa, observa-se também o prolongamento do TP e a não alteração do TT, indicando que o composto interfere na atividade dos fatores das vias intrínseca e extrínseca da coagulação e não sobre a atividade da trombina. 0 prolongamento do TTPa em plasma deficiente de fator VIII indica que o mecanismo pelo qual o princípio ativo presente no maracujá não envolve a inibição deste fator. A atividade inibitória não foi observada quando o extrato foi dialisado extensivamente, sugerindo ser um inibidor de baixa massa molecular, resistente ao aquecimento a 100°C por 10 minutos, mas termolábil após este período. 0 perfil de eluição do composto por HPLC mostra a característica• hidrofóbica do material e por,análise espectrométrica apresenta massa molecular na faixa de 600-700 Da. Este trabalho fornece evidências preliminares do efeito do extrato do Passiflora edulis Sims f. flavicarpa nos parâmetros da coagulação sanguínea, o que pode ser importante no tratamento e acompanhamento de pacientes anticoagulados ou com doenças hemorrágicas, podendo também abrir perspectivas para o desenvolvimento de compostos, sobretudo inibidores, para use em aplicações biotecnológicas ou terapêuticas.