Avaliação do desenvolvimento do processo alveolar em ratos: biologia estrutural e imunolocalização de proteínas e fatores envolvidos na osteogênese - Sasso, Gisela Rodrigues da Silva [UNIFESP] (2015)
A formacao do processo alveolar ocorre concomitantemente ao desenvolvimento do germe dentario. O osso alveolar, que reveste internamente o processo alveolar, e formado a partir das celulas-tronco ectomesenquimais do foliculo dentario apos o inicio da formacao da raiz. Neste estudo, foi proposto avaliar a imunoexpressao dos marcadores de diferenciacao de osteoblastos durante a osteogenese e verificar se ha uma possivel participacao do VEGF neste processo. A atividade proliferativa e incidencia de apoptose no foliculo dentario foram tambem avaliadas. Alem disso, foi investigada a imunolocalizacao da osteocalcina durante o inicio da formacao do processo alveolar. Foram utilizados embrioes (EM) obtidos de ratas aos 16, 18 e 20 dias de prenhez; ratos pos-natal (PN) com 5, 10 e 15 dias de idade tambem foram utilizados. As cabecas dos EM e dos ratos PN foram fixadas, descalcificadas e Incluídas em parafina. Cortes frontais na regiao do 1o molar superior foram corados com hematoxilina e eosina (HE) e tricromico de Masson, para a descrição morfologica; outros cortes, foram submetidos as reacoes imuno-histoquimicas para deteccao de VEGF, osterix, Runx-2, fosfatase alcalina, osteocalcina, acido hialuronico, Ki-67 e caspase-3 clivada. Alguns cortes foram tambem submetidos as reacoes histoquimicas do picro-sirius red e von Kossa. Fragmentos de maxila foram fixados com glutaraldeido/formaldeido e incluidos em araldite e em LR White. Os cortes ultrafinos dos fragmentos incluidos em LR White foram submetidos a imunocitoquimica para deteccao de osteocalcina, utilizando particulas de ouro coloidal. Nos EM de 16, 18 e 20 dias, poucas celulas positivas a caspase-3 foram observadas, porem o número de celulas positivas ao Ki-67 foi significativamente maior em comparacao aos ratos pos-natal; nos ratos PN 10 e 15 dias, o número de celulas positivas ao Ki-67 reduziu, enquanto o número de celulas positivas a caspase-3 aumentou significantemente. Nos EM de 16 dias, a densidade numérica de celulas imunopositivas ao VEGF, ao Runx2, osterix, osteocalcina e fosfatase alcalina foi alta em relacao aos demais periodos. Frequentemente, estas células estavam associadas a uma delgada camada de matriz ossea adjacente aos vasos sanguineos. O número de celulas positivas para esses marcadores diminuiu significantemente nos EM de 18 e 20 dias, bem como nos PN de 5 dias, porém, aumentou significantemente nos PN de 10 e 15 dias. A análise quantitativa do ácido hialuronico mostrou maior e significante positividade nos EM em relacao aos PN, nos quais houve menor positividade aos 10 e 15 dias. A análise ultraestrutural revelou particulas de ouro coloidal no interior das vesiculas da matriz, indicando a presenca de osteocalcina no interior destas estruturas no início da formacao do processo alveolar. Alem disso, a osteocalcina foi tambem observada em intima associacao com as fibrilas colagenas da matriz ossea. A intima associacao entre a diferenciacao de osteoblastos e a imunoexpressao do VEGF, indica que este fator angiogenico esta envolvido na diferenciacao de osteoblastos e, consequentemente, na formacao do processo e osso alveolares. A medida que ocorre a expressao de fatores associados a diferenciacao de osteoblastos, a atividade proliferativa das celulas do foliculo dentario reduz drasticamente, enquanto que a apoptose aumenta significantemente no foliculo dentario. Alem disso, nossos resultados indicam que a osteocalcina deve atuar na nucleacao dos cristais de hidroxiapatita no interior das vesiculas da matriz, desempenhando um papel importante no início da mineralizacao do processo alveolar.