Investigação da influência do zinco na participação do cininogênio humano de alta massa molecular em eventos celulares - Souza, Daianne Santos Paranhos de [UNIFESP] (2015)
Objetivo: o objetivo geral do presente trabalho é estudar a influência do íon zinco na interação celular, mediada por proteoglicanos, do cininogênio de alta massa molecular íntegro (HK) ou livre de bradicinina (HKa). Métodos: identificar a atividade enzimática de células de diferentes linhagens epiteliais de tumor de ovário de hamster chinês sobre o cininogênio de alto peso molecular, de forma intracelular (através do lisado) ou extracelular (na superfície de células em cultura) através de eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecil sulfato de sódio e imunodetecção; estudar a influência do íon zinco na endocitose de cininogênio de alto peso molecular (através de microscopia confocal) e os efeitos do íon em eventos celulares como morte celular, apoptose e viabilidade em células em cultura, através de ensaios utilizando o corante Trypan Blue, anexina V e o reagente MTT, respectivamente. Resultados: ambas as linhagens liberam bradicinina a partir do cininogênio de alto peso molecular na superfície celular pela ação de serino- e cisteinoproteases. O cininogênio de alto peso molecular íntegro e cininogênio de alto peso molecular livre de cinina são internalizados pelas células epiteliais de tumor de ovário de hamster chinês selvagens, localizando-se em vesículas endocíticas ácidas, indicando a importância do proteoglicano de heparam sulfato como mediador. A hidrólise do cininogênio de alto peso molecular íntegro foi estudada através de frações de membrana e lisados, preparados a partir dessas linhagens celulares, onde observamos que: (1) enzimas de membrana e de lisado das duas linhagens hidrolisam o HK em locais diferentes; (2) a atividade cininogenásica é influenciada pelo pH na fração de lisado de ambas as linhagens; (3) atividade cininogenásica difere entre estas duas linhagens celulares sugerindo a influência de glicosaminoglicanos no processamento do cininogênio de alto peso molecular; (4) tanto a molécula de cininogênio de alto peso molecular quanto o íon zinco influenciam eventos fisiológicos como morte e viabilidade celular. Conclusão: nossos resultados mostram que o íon zinco na presença de PGs (CHO-K1) promove a endocitose do HK na sua forma íntegra com fraca hidrólise e este HK endocitado reduz a viabilidade celular provocando necrose, sendo que o zinco pode amenizar esse efeito.