Estabelecimento da linhagem de células tronco do tecido adiposo de suínos - Zuttion, Marilia Sanches Santos Rizzo [UNIFESP] (2013)
Celulas tronco mesenquimais (CTM) de suinos tem sido isoladas previamente da medula ossea e do tecido adiposo. Tem sido demonstrado que essas celulas sao capazes de se diferenciar em osso, cartilagem e gordura, mas o potencial de diferenciacao muscular e cardiomiogenica das CTM de suinos ainda nao foram demonstrados. As celulas tronco (CT) derivadas do tecido adiposo podem ser bons candidatos para a engenharia tecidual cardiaca, uma vez que podem ser obtidas de pacientes atraves de um metodo simples e minimamente invasivo e em grandes quantidades. O porco e um modelo animal comum em pesquisas pre-clinicas usando CTM humanas devido a similaridade entre as duas especies em anatomia, fisiologia e manifestacao de doencas. Objetivos: o objetivo deste estudo foi realizar o isolamento e caracterizacao as CTM de tecido adiposo da especie suina e realizar diferenciacao muscular e cardiomiogenica. Metodologia: fragmentos de tecido adiposo foram usados para isolar progenitores e CT de porcos adultos saudaveis. As CT de tecido adiposo de suino foram isoladas de acordo com o protocolo estabelecido para CTM de tecido adiposo humano. Celulas isoladas foram caracterizadas quanto a expressao de marcadores de CT e progenitores. Alem disso, ensaios de diferenciacao e avaliacao do potencial teratogenico tambem foram realizados. Resultados: Nas primeiras passagens do cultivo foi possivel distinguir duas populacoes distintas compostas por celulas epitelial-simile e fibroblast-simile. Contudo, na quarta passagem a cultura de CTM de tecido adiposo de suinos era composta apenas por celulas fibroblast-simile. Nas primeiras passagens as celulas foram positivas para oct-4, sox2, nanog, CD44, CD90, CD105, vimentina, fibronectina, nestina citoqueratina-pan, e-caderin e conexin- 43. Adicionalmente, em passagens altas as celulas fibroblast-simile foram imunopositivas para oct-4, CD44, e-caderin e PCNA e negativas para citoqueratinapan. Estas celulas foram capazes de diferenciar-se em celulas de origem mesodermal como: osso, cartilagem e gordura. Alem disso, as CTM de tecido adiposo de suinos sob condicoes de cultivo miogenico foram capazes de se diferenciar em celulas musculares e cardiomiocitos. Os cardiomiocitos expressaram marcadores especificos como gata-6 e cardiotin. E finalmente, as CTM de tecido adiposo de suino, quando injetadas em camundongos imunossuprimidos nao formaram teratomas. Conclusao: nossos dados sugerem que as celulas tronco isoladas do tecido adiposo de suinos apresentam caracteristicas semelhantes as mesmas humanas com capacidade de se diferenciar em varios tecidos mesodermais incluindo cardiomiocitos