O papel das integrinas de células epiteliais na secreção de citocinas induzida por paracoccidioides brasiliensis - Barros, Bianca Carla Silva Campitelli de [UNIFESP] (2015)
Paracoccidioides brasiliensis é um dos agentes etiológicos da paracoccidioidomicose (PCM), micose humana sistêmica mais prevalente na América Latina. Uma vez nos pulmões, P. brasiliensis interage com células epiteliais, ocasionando a ativação de vias de sinalização que culminam na modulação da resposta imune inata do hospedeiro, ao promover a secreção de citocinas. Nesta dissertação, investigamos o envolvimento de integrinas na secreção das citocinas IL-6 e IL-8 por células epiteliais pulmonares humanas A549 na presença de leveduras de P. brasiliensis. Além disso, analisamos se durante a interação A549-P. brasiliensis ocorre o recrutamento destes receptores para "membrane rafts" e se estes domínios de membranas celulares são importantes para a secreção de IL-6 e IL-8 por estas células epiteliais. Demonstramos que P. brasiliensis induziu aumento na expressão de integrinas alfa3, alfa5 e beta1 em células A549 e que estas integrinas foram capazes de se ligar a leveduras deste fungo. Utilizando RNA de interferência, observamos que o silenciamento de integrinas alfa3 e alfa5 em células A549 promoveu redução nos níveis de IL-6 e IL-8 nos sobrenadantes de cultura durante interação com P. brasiliensis, o que sugere o envolvimento destes receptores na secreção de citocinas por células A549. A partir do isolamento de membranas resistentes a detergente (DRMs), que contêm "membrane rafts", demonstramos que este fungo promove o recrutamento de integrinas alfa3, alfa5 e beta1 para estes domínios de membranas celulares. Utilizando metil-beta-ciclodextrina, mostramos que o recrutamento de integrinas para "membrane rafts" foi dependente de colesterol. Além disso, verificamos que a nistatina (composto que desorganiza "membrane rafts") reduziu a secreção de IL-6 e IL-8 por células A549 infectadas com P. brasiliensis, indicando que "membrane rafts" estão envolvidos na secreção destas citocinas. Deste modo, demonstramos o envolvimento de integrinas e "membrane rafts" na secreção de IL-6 e IL-8 por células epiteliais A549 infectadas com leveduras de P. brasiliensis.