Influência dos contraceptivos orais em componentes da via Wnt e metabolômica de células-tronco endometriais humanas derivadas de fluido menstrual - Moraes, Gabrielle Ferrante Alves de [UNIFESP] (2023)
Objetivo: Estudar o efeito do uso de contraceptivo hormonal oral (CHO) em células-tronco endometriais humanas (CTEs) por meio do isolamento e caracterização in vitro, da via Wnt e da metabolômica do meio de cultivo condicionado e das próprias células. Métodos: Este estudo foi dividido em 2 subestudos. Foram estudados dois grupos de voluntárias de acordo com o uso de CHO, sendo 10 voluntárias constituindo o grupo sem uso de contraceptivo (CT) e 7 voluntárias constituindo o grupo com uso de contraceptivo (CHO). Foi feito o isolamento de CTEs a partir de fluido menstrual e as células foram caracterizadas através de marcadores de superfície celular, mesenquimais (CD105 e CD146) e hematopoiéticos (CD45 e CD34), e por ensaio de diferenciação celular adipogênica, condrogênica e osteogênica, para posterior utilização nos subestudos. No subestudo I, componentes da via de sinalização Wnt, Wnt3a, Wnt7a e β-Catenina, foram avaliados quanto à sua expressão gênica, por PCR em Tempo Real, e quanto à sua expressão proteica, por Citometria de Fluxo. No subestudo II, foram avaliados os metabólitos presentes nas CTEs e aqueles secretados no meio de cultivo durante seu cultivo in vitro, a partir de análise metabolômica por MALDI-TOF. Resultados: Durante o cultivo celular, as CTEs permaneceram fenotipicamente estáveis, apresentaram alta expressão dos marcadores de superfície mesenquimais e baixa expressão dos hematopoiéticos, além de mostrarem potencial de diferenciação adipogênica, condrogênica e osteogênica. Os resultados mostraram que o nível de expressão gênica de Wnt3a, Wnt7a e β-catenina no grupo CHO foi significativamente menor do que no grupo CT, porém a expressão proteica não revelou diferenças significativas entre os grupos. Na análise para avaliar os efeitos do CHO na expressão de metabólitos, os resultados demonstraram que o grupo CT distinguiu-se claramente do grupo CHO. O perfil metabolômico das células e de seu secretôma apresentou diferença entre os grupos. Conclusão: O uso de CHO altera a expressão gênica de Wnt3a, Wnt7a e β-Catenina em CTEs, porém não altera sua expressão proteica. A análise metabolômica permitiu inferir que o metabolismo celular e, principalmente, secretômico das CTEs sofre alterações sob influência do CHO.