Estudo da regulação do NF-kB no carcinoma renal metastático após terapia gênica com endostatina - Braga, Marina de Souza [UNIFESP] (2015)
O carcinoma de células renais (CCR) representa 3% dos tumores malignos humanos e, aproximadamente, 90% das neoplasias malignas renais. O subtipo mais frequente de CCR é o de células claras (CCRcc). A maioria dos pacientes possui mutação no gene supressor tumoral de von Hippel- Lindau (VHL) o que resulta em um aumento da transcrição de vários fatores angiogênicos. O fator de transcrição кB (NF-кB) compreende uma família de proteínas, sendo que no CCR, o aumento da atividade do NF-кB correlaciona-se com o aumento de marcadores de angiogenese, apoptose e também com o desenvolvimento e progressão. Em mamíferos são conhecidos cinco membros da família Rel/NF-кB: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-кB1 -p105/p50 e o NF- кB2-p100/p52. Na última década vários trabalhos foram publicados correlacionando a ativação do NF-кB no CCR com a angiogênese, resistência à quimioterapia e à apoptose. A endostatina (ES) é o produto da clivagem da porção carboxi-terminal do colágeno XVIII. In vitro, ela inibe a proliferação, migração e estimula a apoptose de células endoteliais. In vivo, a eficácia da ES no tratamento de diversos tipos tumorais tem sido demonstrada. A terapia gênica pode ser definida como a transferência de material genético visando o tratamento de patologias hereditárias ou adquiridas. Neste trabalho foi avaliado a modulação do NF-кB em células Renca-EGFP de pulmões metastáticos do modelo experimental singeneico ortotópico metastático, e as alterações nos parâmetros celulares em células Renca após o silenciamento do gene nf-kb1. Na primeira etapa desse trabalho avaliou-se a ativação do NF-кB no adenocarcinoma metastático com e sem tratamento antiangiogênico com ES. O tratamento com ES levou a uma baixa expressão dos genes bcl-3, nf-kb1 e c-Rel por PCR-RT array. Foi mostrado a ligação do NF-кB ao DNA em todas as amostras, entretanto nas células do grupo ES observou-se uma redução da atividade de ligação. Foi confirmado o deslocamento da subunidade p50 no grupo Controle. A subunidade p50 teve marcação citoplasmática expressiva e difusa bem como uma significativa marcação nuclear. Nos nódulos tumorais do grupo ES a subunidade p50 apresentou marcação citoplasmática e nuclear menos intensa. A expressão da Bcl-3 foi bastante evidente no núcleo e no citoplasma das células metastáticas dos animais do grupo controle e do grupo ES. A interação física entre a p50 e a Bcl-3 foi confirmada nos extratos nucleares das células dos pulmões metastáticos. Na segunda etapa do trabalho realizamos a avaliação de parâmetros celulares da p50 nas células Renca utilizando a técnica de RNA de interferência. Ao final da transfecção foi demonstrado a inibição da expressão dos níveis de p105/ p50, e evidenciado alterações na proliferação celular, diminuição do tempo de dobramento celular nas células Renca silenciadas em relação a Renca-Mock. A análise do ciclo celular revelou um aumento significativo de células Renca silenciadas nas fases G0/G1 em relação à célula Renca-Mock. As células Renca silenciadas apresentaram também expressão diminuída da ciclina D, umas das principais proteínas reguladoras das fases G0/G1. Nossos resultados confirmaram a presença do complexo p50/ Bcl-3 em extratos nucleares de células de tumor de pulmões metastático, sugerindo que a p50 juntamente com Bcl-3 desempenham um papel regulador na transcrição de genes em RCC; e com o silenciamento do gene nf-kb1, foi mostrado a participação da p50 nas vias de sinalização da proliferação das células Renca e indicando seu potencial como alvo para terapia antitumoral.