Adipócitos humanos cultivados e mobilização de cálcio induzida pela angiotensina II e insulina - Gaiba, Silvana [UNIFESP] (2005)
Introdução: O tecido adiposo armazena energia e secreta várias moléculas endócrino/parácrina como a angiotensina II (AII) e expressa receptores como de insulina e de AII (AT1 e AT2). Esses hormônios estão envolvidos em várias patologias tais como a obesidade, hipertensão, diabetes e aterosclerose. Objetivos: Caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos e da resposta ao estímulo dos hormônios AII e insulina. Métodos: Para caracterização morfológica fez-se a coloração com Oil red O, gotículas de lipídios, MitoTracker red, mitocôndrias e ERTracker, retículo endoplasmático. Determinaram-se também as fases do ciclo celular, tamanho e complexidade das populações das células cultivadas e dispersas através da citometria de fluxo. O cultivo das células foi realizado de acordo com Hauner et al. (1989). Para as medidas do Ca2+ intracelular foi utilizada a análise por microscopia de fluorescência de alta resolução. As células adiposas foram caracterizadas por imunocitoquímica utilizando-se anticorpos para insulina, AT1 da AII, receptor de insulina e lectina conjugados com um marcador fluorescente. Resultados: Por microscopia confocal verificou-se a presença de várias gotículas lipídicas, citoesqueleto, mitocôndrias, retículo endoplasmático e membrana celular preservados, e próprios dos pré adipócitos, Os pré-adipócitos apresentaram receptores e grânulos de insulina e o receptor AT1. Também se verificou por citometria de fluxo a amostra de células rescém-dispersas que pôde ser classificada como pré- adipócito. A avaliação temporal dos níveis de Ca2+ nas células de pré-adipócitos humanos estimuladas com a AII e insulina induzem respostas transientes no caso da AII o aumento imediato das [Ca2+]i seguido da diminuição desta resposta e no caso da insulina apresentou oscilações nas [Ca2+]i na presença deste agonista. Conclusões: Determinou-se a caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos como pré-adipócitos por:apresentarem morfologia semelhante a fibroblastos e inúmeras gotículas de lipídios; evidenciado a presença dos receptores de angiotensina II (AT1) e insulina (RI) por imunofluorescência. As células presentes na amostra do tecido adiposo apresentaram tamanho e complexidade de pré-adipócitos; Nos pré-adipócitos humanos cultivados verificou-se o aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ que foi transiente para o estímulo com angiotensina II e oscilatório para a insulina.