Bioprospecção de micro-organismos com potencial para biorremediação de óleo diesel - Melo, Letícia Beatriz Ueda [UNIFESP] (2022)
A contaminação por hidrocarbonetos derivados do petróleo é uma das principais preocupações ambientais, devido a frequência de acidentes e aos impactos causados nos ecossistemas e na saúde. No Estado de São Paulo, a principal fonte de contaminação provém de postos de combustíveis, totalizando 70% das áreas registradas. Diante deste cenário, é necessário realizar o tratamento para reduzir ou eliminar os contaminantes. Processos de biorremediação têm se destacado como alternativas promissoras para a descontaminação ambiental. Dessa forma, este estudo teve como objetivo realizar a bioprospecção de micro-organismos de áreas contaminadas por óleo diesel e avaliar sua capacidade para biodegradação deste óleo por culturas puras. Para tanto, foram realizadas coletas de amostras com diferentes períodos de contaminação, em uma área de estacionamento de caminhões, que atuava como posto de combustível em Cubatão, São Paulo. A identificação da comunidade microbiana cultivável foi analisada através da técnica metabarcoding e a seleção dos micro-organismos degradadores do óleo diesel foi realizada por meio do enriquecimento seletivo, com óleo diesel como única fonte de carbono. Posteriormente, os micro-organismos foram isolados e identificados primeiramente através da espectrometria de massas e, posteriormente através da amplificação do gene 16S rRNA. O potencial para biodegradação do contaminante foi avaliado por meio de análise de oxirredução utilizando indicador 2,6 diclorofenol-indofenol (DCPIP) e confirmado por cromatografia gasosa (CG-FID). Ainda, a amplificação do gene alkB foi realizada para verificar a presença de uma das enzimas responsáveis pela biodegradação de hidrocarbonetos alcanos e a produção de biossurfactantes e enzimas extracelulares também foram avaliadas. A partir da análise metabarcoding, foi possível verificar diferença na composição dos micro-organismos dos diferentes pontos amostrais, sugerindo que o tempo de contaminação modula a microbiota do solo. Dessa forma, foi observada a abundância dos gêneros Bacillus, Acinetobacter e Pseudomonas nos diferentes pontos de coleta. Após enriquecimento com óleo diesel como única fonte de carbono, quatro cepas de cada ponto foram isoladas, com abundância do gênero Pseudomonas. Através da amplificação do gene alkB, foi possível detectar uma das enzimas responsáveis pelo metabolismo do óleo diesel (alcano monooxigenase), nas bactérias do gênero Pseudomonas, confirmando o potencial destas linhagens em degradar o óleo. Os isolados não apresentaram produção de enzimas extracelulares nem de biossurfactantes, evidenciando que o metabolismo ocorre apenas intracelularmente. Dentre os isolados, as cepas Pseudomonas nitroreducens, Pseudomonas koreensis, Acinetobacter soli e Ralstonia picketti apresentaram melhor eficiência em degradar o óleo diesel em 42,7; 40,8; 37,5 e 37,2%, respectivamente. Dessa forma, a utilização destas cepas pode ser uma alternativa para realizar a biorremediação de locais contaminados com óleo diesel, através da bioaumentação.