Efeito do peptídeo ligante de heparam sulfato na progressão tumoral - Melo, Carina Mucciolo [UNIFESP] (2018)
O heparam sulfato (HS) é amplamente distribuído e conservado evolutivamente, um fato que remonta à importância vital desta molécula no desenvolvimento celular e funções como proliferação, migração, adesão e diferenciação celular. Os proteoglicanos de heparam sulfato podem atuar como co-receptores, interagindo com numerosos fatores de crescimento, fatores angiogênicos e citocinas e modulam a patogênese de muitas doenças, incluindo a carcinogênese e inflamação. O objetivo deste estudo foi avaliar o peptídeo ligante de HS e verificar o efeitosobre a progressão tumoral. O peptídeo ligante de HS foi selecionado usando a técnica de Phage display. A ligação do peptídeo ao HS foi avaliado in vitro, utilizando a emissão de triptofano e a análise de FRET (transferência de energia ressonante por fluorescência), enquanto, o ensaio in vivo foi determinado por análise em microscopia confocal time-lapse. e imunomarcação dos embriões de Danio rerio. Os resultados mostraram que o peptídeo ligante de HS interage especificamente com HS/heparina. Os ensaios In vivo (modelo zebrafish), ex vivo (ensaio de aorta de camundongos) e in vitro, utilizando células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC), evidenciaram que o peptídeo ligante de HS é capaz de inibir a angiogênese. O teste de proliferação celular mostrou que FGF-2, mas não o VEGF-A, está envolvido com a resposta do peptídeo ligante de HS no processo angiogênico. A migração de células humanas tumorais de mama triplo negativas, MDA-MB-231, diminuiu na presença do peptídeo ligante de HS. No entanto, a linhagem MDA-MB-231-BR, que apresentam alta capacidade de desenvolver metástase cerebral, quando injetadas em embriões de galinha em presença do peptídeo ligante de HS, mostrou que tal peptídeo não foi capaz de inibir extravasão e colonização metastática. As células de câncer de mama triplo negativas, derivadas da ressecção cirúrgica de paciente com câncer de mama (pacient derived xenotransplant, PDX) foram plaqueadas em cultura 3D. A proliferação e a viabilidade de tais células de câncer de mama PDX não foram afetadas pelo peptídeo ligante de HS. As células PDX estavelmente transduzidas com proteína fluorescente vermelha (RFP), foram injetadas no saco de vitelínico de embriões de zebrafish e tratados com peptídeo ligante de HS. O peptídeo diminuiu a progressão do tumor in vivo e aumentou significativamente a sobrevida dos animais. Os resultados combinados permitem concluir que o peptídeo se liga ao HS e inibe a angiogênese, possivelmente por sinalização mediada pelo FGF-2. Ainda, a inibição da angiogênese parece ser suficiente para diminuir o desenvolvimento do tumor nos ensaios in vivo. O peptídeo ligante de HS pode ser útil como um potencial composto anti-neoplásico.