Análise físico-química de hormônio de crescimento humano recombinante em diferentes etapas do processo de produção - Dalmora, Sergio Luiz [UNIFESP] (1998)
Padronizou-se metodologia de cromatografia liquida de alta efiCiência em fase reversa (RP-HPLC) isocratica para determinacao de hormonio de crescimento humano recombinante (rec-hGH) em extratos periplasmicos de E. coli. O procedimento possibilitou uma rapida analise inicial da qualidade e quantidade de hGH secretado no espaco periplasmico, imediatamente apos, ou mesmo durante a fermentacao. Considerando que a RP-HPLC nao identifica isomeros de massa, estes foram determinados atraves da analise paralela dos extratos periplasmicos por cromatografia liquida de alta efiCiência por exclusao molecular (HPSEC) e radioimunoensaio (RIE) das fracoes eluidas. O metodo permitiu obter em 24 h, do inicio do processo de fermentacao, uma avaliacao da atividade, identidade, rendimento e contaminantes relacionados ao hGH. Entre esses incluem-se os sulfoxidos e desamidados, dimero e formas de alta massa molecular. As metodologias padronizadas foram empregadas em diferentes etapas da producao de rec-hGH. O processo de fermentacao de E. coli transformada foi otimizado, escolhendo-se o melhor tempo de ativacao, que propiciou maior nivel de secrecao de hGH e a menor quantidade de formas alternadas. Analisou-se uma das primeiras fases do processo de purificacao, confirmando-se a ausencia de perdas significativas em formas polimericas. A liofilizacao foi aprimorada, possibilitando a preparacao e estudo de diferentes padroes. Todos esses estudos acrescentaram importantes conhecimentos para o controle de qualidade do produto farmaceutico injetavel. que foi realizado de acordo com as recomendacoes das Farmacopeias Europeia e Brasileira epm-015351.pdf