A liberação de moléculas de superfície gp82 e gp90 pelas formas metacíclicas do Trypanosoma cruzi é regulada por fosfolipase C e o arranjo de esteróis na membrana e modula o processo de invasão celular - Loch, Leonardo [UNIFESP] (2022)
Os tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruzi liberam as moléculas de superfície gp82 e gp90 no meio extracelular, tanto na forma solúvel quanto na forma associada a vesículas. Essas glicoproteínas estágio-especificas estão envolvidas na invasão da célula hospedeira. O objetivo geral desta tese é elucidar os mecanismos de liberação de gp82 e gp90 pelos parasitas e determinar a influência das moléculas liberadas no processo de invasão da célula hospedeira. Durante a interação de células HeLa com a cepa G, que é pouco invasiva, foi detectada a liberação de gp82 e gp90 na forma de vesículas, enquanto na interação com a cepa CL, que é bastante invasiva, tal liberação não foi observada. A análise por microscopia confocal revelou uma distribuição diferenciada de gp82 e gp90 na superfície das cepas G e CL, que se distinguem morfologicamente. O perfil proteico dos meios condicionados das cepas G e CL foi similar, mas em experimento de western blotting foi detectada grande diferença no conteúdo de gp82 e gp90 entre as cepas, com expressão muito maior de ambas as proteínas na cepa G. Em ensaios de invasão celular, a presença de meio condicionado da cepa G reduziu significativamente a invasão da cepa CL. A depleção de gp82 no meio condicionado da cepa G, utilizando beads magnéticas ligadas a anticorpo monoclonal específico, aumentou o efeito inibitório na internalização da cepa CL, ao contrário do meio depletado em gp90. O efeito da droga depletora de colesterol, metil-β-ciclodextrina, sobre a liberação de gp82 e gp90 pela cepa G foi examinado. O meio condicionado dos parasitas tratados com a droga apresentou em western blot níveis aumentados de gp82 e gp90, e seu efeito inibitório da invasão da cepa CL foi maior que o controle não tratado. A participação de fosfolipase C da cepa G na liberação de gp82 e gp90 foi também investigada. Redução na liberação de ambas glicoproteínas foi detectada após tratamento dos parasitas com um inibidor da atividade de fosfolipase C. Esses resultados contribuem para melhor compreensão dos mecanismos de liberação de gp82 e gp90 pelas formas metacíclicas de T. cruzi e do papel das moléculas liberadas no processo de invasão celular.