Diversidade e eficiência simbiótica de estirpes de rizóbios isoladas de nódulos de pau-rainha (Centrolobium paraense Tul.) - Alexandre Cardoso Baraúna (2013)
Centrolobium paraense Tul. conhecida popularmente como pau-rainha é uma leguminosa arbórea que ocorre em ilhas de mata, florestas de transição e matas de galerias das savanas de Roraima. Esta leguminosa se beneficia do processo de fixação biológica de nitrogênio (FBN) através da simbiose com bactérias do grupo rizóbio. No entanto, pouco se sabe sobre a diversidade e a eficiência dessas bactérias em simbiose com pau-rainha. Este estudo teve como objetivo a caracterização de rizóbios associados às raízes de pau-rainha em Roraima, bem como a avaliação da eficiência simbiótica na promoção do crescimento de mudas através da FBN. Para isso, plantas de pau-rainha foram cultivadas em solos coletados em ilhas de mata localizadas nos municípios de Mucajaí, Bonfim, Boa Vista e Normandia para obtenção dos nódulos, e posterior isolamento das bactérias em meio de cultura. As bactérias foram caracterizadas morfologicamente e agrupadas de acordo com os perfis gerados. Representantes de cada grupo foram avaliados quanto à capacidade de nodulação utilizando o feijão-caupi como planta hospedeira. Os que apresentaram resultados positivos foram caracterizados geneticamente através da técnica de BOX-PCR e sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. Em seguida uma nova autenticação foi realizada, e os isolados que repetiram os resultados anteriores ou apresentaram similaridade com espécies reconhecidamente nodulíferas foram selecionados para teste de eficiência em pau-rainha. Para avaliar a eficiência da FBN, os rizóbios foram utilizados na inoculação de plântulas de pau-rainha sob condições estéreis de casa de vegetação durante 100 dias, procedendo à análise estatística para os parâmetros: nitrogênio total, massa seca da parte aérea, área foliar, massa seca de raiz, número de folíolos, altura da planta, diâmetro do caule, massa seca de nódulos e número de nódulos. Os identificados como Bradyrhizobium foram avaliados através do sequenciamento de cinco genesglnII, gyrB, rpoB, recA e dnaKpara análise de sequência multilocus (MLSA). De um total de 355 nódulos coletados, foram obtidos 178 isolados, sendo a maioria de crescimento lento com capacidade de alcalinizar o meio de cultura, compatíveis com o gênero Bradyrhizobium. A partir da caracterização morfológica foi gerado um dendrograma onde se constatou a formação de nove grupos com perfis distintos. Quarenta isolados foram selecionados para a autenticação e trinta e seis foram capazes de induzir a nodulação. A análise do BOX-PCR revelou-se que estes isolados apresentam pouca semelhança entre eles. No entanto a análise do sequenciamento do gene 16S rRNA, revelou que a maioria dos isolados pertenciam ao gênero Bradyrhizobium. Estes confirmaram a capacidade de nodulação e foram selecionados para ensaio de eficiência em pau-rainha juntamente com quatro isolados identificados comoRhizobium tropici e Pleomorphomonas oryzae. Os isolados pertencentes ao gênero Bradyrhizobium foram os mais eficientes, com destaque para os isolados ERR 326, ERR 399 e ERR 435 que proporcionaram os melhores resultados em todas as avaliações. A partir da MLSA ficou evidenciado que os isolados apresentaram grandes divergências com as estirpes de referência de Bradyrhizobium, indicando haver espécies novas colonizando o pau-rainha.