Planejamento, síntese e avaliação da atividade biológica de peptídeos e conjugados peptídeo-fármacos, com atividade antibacteriana e antiparasitária - Santos, Paulo Pitasse (2022)
Peptídeos são compostos por aminoácidos ligados em sequência e compõem uma classe de moléculas de interesse dentro da química medicinal. Tanto por sua alta seletividade por alvos específicos quanto pela complexidade de suas estruturas, que permitem que sejam aplicados com diferentes funções, tal qual compostos de ação antimicrobiana ou como agentes de penetração celular conjugados a fármacos. Peptídeos e conjugados possuem alto potencial de aplicação em áreas carentes de inovação terapêutica, como no desenvolvimento de antibióticos para o tratamento de bactérias multirresistentes ou de novos agentes quimioterápicos para o tratamento da doença de Chagas. Neste trabalho são propostas três séries de peptídeos anfifílicos catiônicos com potencial aplicação como antimicrobianos e como peptídeos de penetração celular. Também se avalia a estratégia de conjugação peptídeo-fármaco com ou sem controle de liberação do fármaco no ambiente intracelular, utilizando peptídeos de interesse dentro da série proposta e o peptídeo helicoidal poliprolina tipo II P14LRR, de reconhecida atividade antimicrobiana e de penetração celular. A preparação de peptídeos e conjugados envolveu o emprego de técnicas de síntese orgânica clássica, com otimização de protocolos presentes na literatura, bem como a metodologia de síntese de peptídeos em fase sólida. Os fármacos linezolida (Lnz) e benznidazol (Bzd) foram utilizados para a estratégia de conjugação. Os conjugados peptídeo-fármaco conectados via espaçador contendo ligação dissulfeto, redutível no meio intracelular, foram avaliados quanto sua à cinética de liberação de fármaco induzido quimicamente. Adicionalmente os peptídeos e conjugados foram avaliados sobre Escherichia coli quanto à sua atividade antimicrobiana e possíveis mecanismos de ação. O desenho das séries permitiu traçar uma relação estrutura atividade, de modo que o peptídeo Ac-YGRRLLRRLL-NH2 se mostrou o mais promissor para esta aplicação (MIC = 2 µM). Foi avaliada também a atividade contra formas amastigotas e tripomastigotas de Trypanosoma cruzi, de modo que o peptídeo Ac-YGRRLLRRLLRRLLRRLL-NH2 apresentou alta efetividade na inibição da infecção do parasito in vitro (EC50 = 299 ± 86 nM). Foram realizados ainda experimentos para a avaliação do potencial de penetração celular do peptídeo Fl-YGRRLLRRLL-NH2 e do conjugado Lnz-Fl-P14LRR, ambos marcados com sonda de fluoresceína. Através de técnicas de citometria e de microscopia confocal foi possível constatar o acúmulo dos compostos no meio intracelular e, no caso de Lnz-Fl-P14LRR, indicativos de sua colocalização em nível subcelular com lisossomos.