Estudo bioquímico e eletrofisiológico dos efeitos do triclosan (TRN) e da clorexidine (CHX) sobre mitocôndrias isoladas, células do epitélio oral e interaçoes com materiais restauradores odontológicos - Newton, Ana Paula Negrelo (2013)
Resumo: Triclosan (TRN) e clorexidine (CHX) sao dois agentes antissepticos largamente utilizados em odontologia. O presente estudo avaliou os efeitos do TRN sobre o metabolismo energetico mitocondrial e sobre importantes processos biologicos, tais como lipoperoxidacao e transicao de permeabilidade mitocondrial (MPT). Alem disso, os efeitos destes dois agentes foram avaliados em relacao a sua habilidade de interagir com materiais restauradores odontologicos, tais como amalgama e compositos. Em mitocondrias isoladas de figado de rato oxidando glutamato, o estado III da respiracao foi significativamente (p < 0,05) reduzido na presenca de TRN, alcancando uma inibicao de 31% com 60 nmol TRN. mg-1 proteina, enquanto o estado IV da respiracao foi significativamente induzido, alcancando um estimulo maximo de 452% com 30 nmol TRN. mg-1 proteina. Analises da atividade enzimatica dos complexos da cadeia respiratoria identificaram significativa inibicao entre os complexos II e III. Entre os parametros avaliados, as atividades da ATPase em mitocondrias isoladas e rompidas foram mais afetadas, sendo estimulada em ~600% em mitocondrias intactas e inibida em 40% em mitocondrias rompidas. O potencial eletrico de membrana (ƒ´ƒé), estimado por espectrofluorimetria, foi completamente colapsado na presenca de 15 nmols TRN. mg-1 proteina. Este agente (10 nmols TRN. mg-1 proteina) inibiu completamente o inchamento mitocondrial energizado. O TRN estimulou a liberacao de ferro de ferritina de forma dose-dependente, mas inibiu a lipoperoxidacao mitocondrial ferro-dependente.Analises de UV/VIS do TRN em presenca de ions ferro mostraram mudancas significativas, sugerindo que uma interacao deste agente com tais ions nao pode ser descartada, o que justificaria os resultados obtidos com a lipoperoxidacao. Por outro lado, a CHX tambem mostrou diferencas no seu espectro UV/VIS em presenca de ions ferro, mas este agente estimulou a lipoperoxidacao mitocondrial ferro-dependente, mostrando um mecanismo de acao diferente do TRN. TRN e CHX tambem mostraram efeitos opostos na MPT: enquanto a CHX estimulou este processo (dados nao mostrados), o TRN o inibiu de forma dose-dependente. Estes resultados foram confirmados por ensaios de pincamento de membranas, os quais mostraram que o TRN inibe/fecha o poro de transicao de permeabilidade mitocondrial (PTP), enquanto a CHX o estimula/abre. Os efeitos citotoxicos do TRN e da CHX foram tambem avaliados, utilizando-se tres diferentes linhagens celulares do epitelio bucal: normal (NOE), pre maligna (MSK Leuk1) e maligna (MDA 886Ln). Mais uma vez, a CHX e o TRN mostraram efeitos opostos: enquanto a CHX foi mais citotoxica contra celulas malignas (DL50= 1,16 ƒÝmol. L-1), comparada as celulas pre malignas e normais (DL50= 7,72 ƒÝmol. L-1 e 6,37 ƒÝmol. L-1, respectivamente), o TRN foi mais citotoxico contra celulas normais (DL50= 2,93 ƒÝmol. L-1), comparado as celulas pre malignas e malignas (DL50= 10,7 ƒÝmol. L-1 e 11,7 ƒÝmol. L-1, respectivamente). Os resultados obtidos por analise de fluorescencia da Rodamina123 e do Hoechst confirmaram que o TRN e a CHX interferem com o ƒ´ƒé mitocondrial e induzem apoptose. A possibilidade de uma interacao entre o TRN e o amalgama dental, estimada atraves da liberacao de Hg, foi descartada, e nenhum dos agentes (TRN ou CHX) afeta a estrutura dos compositos dentais, visto que a sua incubacao com especimens de compositos polimerizados e nao polimerizados nao mostrou nenhuma diferenca, quando comparados ao controle na ausencia de drogas, como verificado por analises de HPLC sob as condicoes experimentais utilizadas. O extenso uso destes agentes deve ser analisado e revisado com cuidado, desde que eles podem desencadear varios efeitos colaterais, como mostrado no presente estudo.