Maturação e vitrificação de oócitos eqüinos incubados em meio contendo hormônio do crescimento e fator de crescimento semelhante à insulina-I - Curcio, Bruna da Rosa (2005)
O objetivo do presente estudo foi determinar os efeitos da adição de hormônio do crescimento eqüino (eGH), fator de crescimento semelhante a insulina-I (IGF-I) e associação de ambos na maturação in vitro de oócitos eqüinos. Além de analisar a integridade estrutural de oócitos maturados e vitrificados em presença de copolímero PVA. Complexos cumulus oophorus compactos (COC) foram cultivados em TCM199 suplementado com 0,1% BSA e antibióticos. COC’s (n=122) foram divididos em quatro tratamentos: 1) Controle, sem adição de hormônios (n=34); 2) 400ng/ml eGH (n=31); 3) 200ng/ml IGF-I (n= 35) e 4) 400ng/ml eGH + 200ng/ml IGF-I (n=22). Após a maturação de 30h, os oócitos foram fixados (n=37) ou submetidos a vitrificação (n=85). Os oócitos criopreservados foram expostos a 1,4 M dimetilsulfóxido (DMSO), 1,8 M etilenoglicol (EG) e 1% copolímero PVA (20% vinil acetato e 80% vinil álcool) por 3 min, transferidos para TCM com 2,8 M DMSO + 3,6 M EG + 0,6 M sacarose + 1% copolímero PVA por 1 min e envasados em palhetas abertas estendidas (OPS). As palhetas foram submetidas ao vapor de nitrogênio por 3 segundos e imersas em nitrogênio líquido. Para o descongelamento, os oócitos foram transferidos para PBS com concentrações decrescentes de sacarose: 0,5M, 0,25M, 0,125M e PBS com 0,4% BSA; permanecendo 5 minutos em cada solução. A avaliação da maturação nuclear e citoplasmática foi realizada por microscopia confocal a laser. Os índices de maturação oocitária foram 26,1% grupo controle, 23,5% eGH, 31,8% IGF-I e 17,6% eGH + IGF-I, não sendo detectada diferença entre os grupos (p>0,05). Contudo o índice de retomada da meiose (MI+MII) no grupo com associação dos hormônios foi de 86,7%, sugerindo que a utilização de eGH e IGF-I poderia incrementar esse índice. Não foram observadas alterações morfológicas nos oócitos vitrificados/descongelados. Pode-se concluir, que não houve diferença no índice de maturação nuclear e citoplasmático com a adição de eGH, IGF-I e associação de ambos. A vitrificação com utilização de copolímeros PVA mostrou-se viável para a criopreservação de oócitos da espécie eqüina, os quais permaneceram com membrana plasmática íntegra, não ocorrendo vacuolização e degeneração celular. Este é o primeiro trabalho que descreve a utilização de copolímeros PVA na vitrificação de oócitos eqüinos.