Expressão de antígenos de Leptospira interrogans em Mycobacterium bovis BCG e avaliação como vacina recombinante contra leptospirose - Dorneles, Jessica (2020)
Mycobacterium bovis BCG é uma vacina viva atenuada, utilizada como vacina contra a tuberculose humana. Dentre várias características atrativas, ela apresenta propriedades adjuvantes, tornando-a um vetor vacinal de alta relevância para expressão de antígenos heterólogos de diversos micro-organismos, incluindo de Leptospira spp., agente etiológico da leptospirose. Esta doença infecciosa acomete animais e seres humanos em todo o mundo. O contágio se dá através do contato direto com água ou solo contaminados com leptospiras patogênicas. As leptospiras são classificadas em mais de 300 sorovares. Esta diversidade antigênica impossibilita que as bacterinas (vacinas produzidas com bactérias inativadas) disponíveis confiram uma proteção de amplo espectro. Visando a produção de uma única vacina protetora contra a leptospirose, estudos são realizados com proteínas comuns a todos os sorovares, estão expostas na membrana externa das leptospiras patogênicas, ou que são expressas no momento da infecção, sendo LipL32, LemA e LigAni, proteínas que possuem tais características. A inserção de genes em um vetor de expressão, é facilitada pelo Padrão BioBricks®, que consiste em uma estratégia que permite a construção de moléculas biológicas compatíveis entre si, onde a clonagem é realizada de forma simples, reprodutível e padronizada. Neste trabalho, quatro porções - P1 (lipL32), P2 (ligAni), P3 (lemA:ligAni) e P4 (lipL32:lemA) – de uma quimera recombinante previamente construída, foram clonadas utilizando a estratégia BioBricks® no plasmídeo pUP500/PpAN. Estas construções foram transformadas em M. bovis BCG cepa Pasteur, e a expressão das proteínas foi detectada por Western blot, onde para detectar as porções 1 e 4 foi utilizado o anticorpo primário anti-LipL32, e anticorpo secundário, anti-IgG de hamster. Para detectar as porções 2 e 3, foi utilizado anticorpo primário anti-LigAni e anticorpo secundário anti-IgG de coelho. Para a inoculação, foram utilizados 5 grupos de dez hamsters sírios cada com idade de 4-6 semanas, sendo estes: grupo 1, rBCG(LipL32); grupo 2, rBCG(LigAni); grupo 3, rBCG(LemA:LigAni); grupo 4, (LipL32:LemA); grupo 5, BCG Pasteur não transformado (controle negativo). Foram administradas duas doses de cada formulação vacinal e do controle negativo, contendo 106 UFC com intervalo de 21 dias, e o desafio foi realizado com 5 x DL50 de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Fiocruz L1130. Os animais foram acompanhados por 30 dias após o desafio. Os sintomas de leptospirose foram observados apenas no grupo controle negativo. As formulações vacinais contendo os rBCGs conferiram 100% de proteção, com imunidade esterilizante. Níveis significativos de anticorpos contra as proteínas LipL32, LemA e LigAni, não foram detectados nos soros dos hamsters. Com este trabalho, conclui-se que as vacinas recombinantes de M. bovis BCG possuem potencial para conferir proteção significativa com imunidade esterilizante contra a leptospirose em desafio homólogo em hamsters, sendo o BCG um vetor vacinal de alta relevância.