Expressão diferencial de genes na germinação do mutante de arroz M3-202 sob baixas temperaturas - Ferrari, Cibele dos Santos (2008)
Maior parte do arroz (Oryza sativa L.) cultivado no Brasil é da subespécie Indica, sensível às baixas temperaturas que ocorrem na Região Sul, principal produtora. Sua estreita base genética tem dificultado a obtenção de cultivares tolerantes ao frio. Uma forma de aumentar a variabilidade genética é por meio de mutações induzidas e seleções genéticas a partir de populações mutantes. Ampliada a variabilidade genética, estudos genéticos e moleculares podem auxiliar na identificação e seleção para a característica desejada. O objetivo deste estudo foi produzir e isolar fragmentos de cDNA expressos numa família mutante de arroz M3-202 em resposta ao frio durante a germinação utilizando a técnica de cDNA/AFLP. Para isto, foram comparados os seguintes genótipos: BRS Firmeza (tolerante ao frio), SCS BRS-113 Tio Taka (sensível ao frio), família mutante M3-202 (tolerante ao frio) e a cultivar BRS-7 Taim (sensível ao frio) a partir da qual a mutante foi originado. As sementes destes genótipos foram submetidas à germinação a 25 ºC e 13 ºC para verificar a expressão diferencial. Foram isolados os embriões das sementes de cada genótipo após 1, 2, e 3 dias da semeadura para 25 ºC e após 4, 8, 11 e 14 dias para 13 ºC e extraído o RNA total utilizando o Reagente Pure Link Plant RNA. Para a síntese dos cDNAs dupla-fita foi utilizado o Kit SuperScript Double-Stranded cDNA Synthesis e as amplificações seletivas foram realizadas utilizando o Kit AFLP Starter Primer e os fragmentos de cDNA produzidos foram visualizados através de eletroforese em gel de poliacrilamida 6%, revelado em nitrato de prata. Comparando-se os genótipos BRS-7 Taim e M3-202, observou-se fragmentos polimórficos nas duas temperaturas avaliadas, sendo que a 13 ºC, houveram 42 fragmentos expressos somente em M3- 202. Em relação à BRS Firmeza, a M3-202 apresentou 7 fragmentos de mesmo peso molecular, quando a 13 ºC, estes mesmos ausentes em BRS-7 Taim. Os fragmentos diferencialmente expressos mais intensos foram recuperados para futuro sequenciamento e identificação dos genes que se expressem nesta família mutante e que estejam, possivelmente, relacionados com a tolerância ao frio no estádio germinativo.