Avaliação da atividade anti-biofilme de inibidor de cicloxigenase e fluconazol em modelo experimental de endocardite por espécies do complexo Candida parapsilosis - SANTOS, Franz de Assis Graciano dos (2017)
Os biofilmes microbianos são comunidades de microrganismos irreversivelmente aderidos a uma superfície que produzem substância polimérica extracelular, a formação de biofilme é relevante devido à contínua liberação de microrganismos que o compõe, os quais mostram fenótipo diverso daquele encontrado na forma planctônica. Candida parapsilosis, atualmente dividida em três espécies distintas, apresentam notória capacidade de formação de biofilmes em cateteres e outros dispositivos implantados. Assim, este trabalho teve objetivos determinar a ação antifúngica e antibiofilme in vitro e in vivo, isolada e sinérgica, de fluconazol e ácido acetilsalicílico frente a modelo experimental de endocardite por espécies do complexo C. parapsilosis. Os isolados foram revisados e caracterizado morfisiologicamente e por técnicas proteômicas. Assim, 20 isolados fenotipicamente classificados como C. parapsilosis foram reclassificados. A atividade antifúngica das drogas foi determinada seguindo as condições descritas no documento M27-S4 do Clinical Laboratory Standards Institute. A Concentração Inibitória Fracionária (FIC) foi avaliada através das combinações de Ácido Acetilsalicilico, fluconazol e Anfotericina B, usando o método de diluição chequerboard. Na sequência Os testes de aderência foram baseados nos trabalhos de Kimura e Pearsall, 1978. Os biofilmes foram preparados usando-se o modelo de placa de microtitulação e quantificados por metodologia colorimétrica do ensaio de redução de hidróxido de tetrazolium (XTT) para avaliação da viabilidade celular, antes e após tratamento. Adicionalmente, empregou-se o uso de microscopia eletrônica de varredura para observação da arquitetura dos biofilmes do complexo C. parapsilosis. O desafio experimental e avaliação clínica, seguiu o modelo murino neutropênico descrito por Craig e Andes 2008 e foi usado para gerar candidíase disseminada e com consequente endocardite. As técnicas proteômicas empregadas distinguiram os isolados como C. parapsilosis stricto sensu (80%), C. metapsilosis (10%) e C. orthopsilosis (10%), das quais 100% foram capazes de formar biofilme, mesmo apresentando fraca adesão as células epiteliais. Testes de sensibilidade frente aos agentes antifúngicos (fluconazol e anfotericina B) demostraram que todas as cepas do complexo C. parapsilosis foram sensíveis. Ácido acetilsalicílico e Fluconazol apresentaram ação sinérgica frente a todas cepas testadas, padrões de antagonismo e de indiferença foram observados quando utilizado fluconazol e anfotericina B, e ácido acetilsalicílico e anfotericina B. O ensaio de redução de XTT demostrou que todas os isolados formaram biofilmes independente das suplementações e em todos tempos testados. Na atividade anti-biofilme podemos observar uma redução significativa na formação de biofilme por espécies do complexo C. parapsilosis, quando utilizado fluconazol e ácido acetilsalicílico de forma combinada. No desafio experimental, a cepa selecionada para modelo de infecção foi a URM 7434 C. orthopsilosis, por apresentar melhor produção de biofilme, menores CIMs, melhor resposta ao tratamento proposto e melhor resposta aos testes pilotos in vivo, os grupos de tratamento, principalmente os que fizeram uso de fluconazol e ácido acetilsalicílico de forma combinada conseguiram debelar a infecção no sétimo dia de tratamento, sem apresentar recidiva até 28º dia de sobrevida. Neste sentido o conhecimento acerca das espécies do complexo C. parapsilosis, além da expressão dos fatores de virulência e perfil de sensibilidade antifúngica, norteiam e viabilizam a conduta terapêutica adequada para tratamento e cura.