Caracterização fenotípica e molecular da microbiota do Riacho Cavouco – UFPE, Campus Recife - ARAÚJO, Lívia Caroline Alexandre de (2018)
O riacho Cavouco corresponde a um riacho urbano que deságua em um dos principais rios do estado de Pernambuco, o rio Capibaribe. Esse riacho tem sua nascente no Campus- Recife da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) e possui uma extensão de aproximadamente 6 Km. O presente estudo objetivou avaliar a qualidade da água e verificar a eficiência de diferentes técnicas para identificação microbiana nesse ambiente, além de comparar perfis fenotípicos e genéticos de isolados ambientais e clínicos de Klebsiella pneumonie e avaliar o efeito do mercúrio (Hg⁺²) na formação de biofilme. Foram realizadas coletas de água em cinco pontos estratégicos do riacho Cavouco e as espécies bacterianas foram identificadas usando métodos bioquímicos e moleculares. Para avaliar a qualidade da agua foram quantificados os coliformes totais e termotolerantes. O perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de K. pneumoniae foi verificado por meio do método de difusão em disco. A resistência ao Hg⁺² foi determinada pela concentração mínima inibitória (CMB) e pela presença do gene merA. A capacidade de formação de biofilme e sua resposta à presença e ausência do Hg²⁺ foram avaliadas utilizando os seguintes procedimentos: crescimento em Vermelho Agar Congo, método do Cristal de Violeta, análise de hidrofobicidade, presença dos genes cps, fimH e mrkD, e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Todas as amostras coletadas foram positivas para coliformes totais e termotolerantes indicando que o ambiente estudado encontra-se impactado. Em relação a caracterização da microbiota local foram identificados fenotípica e confirmados molecularmente 75 isolados bacterianos, pertencentes a 14 gêneros incluindo gram-positivos (Bacillus, Staphylococcus, Brachybacterium, Exiguobacterium) e gram-negativos (Acinetobacter, Enterobacter, Brevundiomonas, Alcaligenes, Klebsiella, Proteus, Escherichia, Pseudomonas, Providencia), os quais correspondem aos primeiros representantes da Bacterioteca de Ambientes Aquáticos Impactados da UFPE. As análises revelaram perfis distintos de resistência ao metal e antimicrobianos, bem como nas respostas as diferentes concentrações do metal na formação de biofilme, entre os isolados clínicos e ambientais de K. pneumoniae. Essa diversidade foi confirmada através da técnica ERIC-PCR que revelou perfis genéticos distintos dentro e entre os dois grupos investigados. Os resultados revelam a diversidade microbiana no riacho Cavouco por meio de técnicas moleculares e demonstra a eficiência da técnica MALDI-TOFMS na identificação de isolados de ambientes aquáticos impactados. Os dados demonstram que o “Cavouco” encontra-se poluído, albergando e disseminando bactérias patogênicas sendo necessário um constante monitoramento desse ecossistema visando a diminuição do impacto ambiental e a qualidade à saúde pública.