Uso de planejamento fatorial na extração de lectinas de entrecasca de Sideroxylon obtusifolium (quixabeira) : purificação e caracterização parcial - Firmino de Santana, Mauricélia (2010)
Este trabalho trata da extração de uma lectina da entrecasca de Sideroxylon obtusifolium utilizando planejamento fatorial completo seguido da purificação da lectina através de fracionamento salino e cromatografia de afinidade em quitina, além da caracterização parcial e avaliação da atividade antimicrobiana. Os resultados revelaram que as melhores condições de extração, obtidas através do planejamento fatorial 24 + 4 pontos centrais, foi a na temperatura de 4ºC, com tempo de extração de 4h, em pH 6,0 e com a concentração de NaCl 0,15 M. A partir destes dados, extrações em tampão citrato fosfato e fosfato de sódio, na faixa de pH (6,0 a 7,5) foram efetuados sendo selecionada a extração em tampão citrato fosfato, pH 6,5; o qual apresentou melhor atividade hemaglutinante específica (AHE) com eritrócitos de coelho. O fracionamento salino revelou que a fração 60-80% (F60-80) foi a que apresentou a maior AHE, a qual foi parcialmente inibida por glicose e totalmente inibida por N-acetil-D-glicosamina. A lectina denominada SoBL (Sideroxylon Obtusifolium Bark Lectin) foi obtida da cromatografia em quitina após eluição com ácido acético 1 M. SoBL é uma proteína termoestável, mantendo sua AH até 100ºC, após 30 min de aquecimento. A avaliação da estabilidade frente a diferentes valores de pH indicou que a lectina apresentou maior AH no pH de 5,0. SDS-PAGE mostrou que SoBL é uma lectina de baixa massa molecular (6,0 kDa) e não glicosilada. SoBL (40μg) não inibiu o crescimento das bactérias Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, pseudomonas aeroginosa e Klebsiela pneumoniae e dos fungos do gênero Fusarium. Em conclusão, uma lectina termoestável e de baixa massa molecular foi obtida da entrecasca de S. obtusifolium por cromatografia de afinidade em quitina, a qual aparentemente, não apresentou atividade antimicrobiana