Desenvolvimento e avaliação da atividade leishmanicida de derivados tiofênicos-acridínicos - REIS, Malu Maria Lucas dos (2021)
A leishmaniose se caracteriza como uma doença infecto-parasitária negligenciada, causada por protozoários intracelulares do gênero Leishmania spp. O tratamento farmacológico utiliza antimoniais pentavalentes, Anfotericina B, Miltefosina e Paromomicina. Porém, esses medicamentos exibem efeitos tóxicos. Sendo assim, existe a necessidade de terapias medicamentosas que forneçam um tratamento mais seguro. No presente estudo, buscou-se planejar e sintetizar derivados tiofênicos- acrídinicos a partir da técnica de substituição por bioisosterismo não clássico (série ACS), previamente sintetizados pelo grupo de pesquisa, e avaliar o potencial leishmanicida e aspectos imunomodulatório. Realizou-se a síntese orgânica a partir da reação de Gewald, sendo por via plena e convergente. A partir da obtenção de três compostos, estes foram direcionados a técnicas de elucidação estrutural: IV, EM e RMN. Após a identificação estrutural e avaliação da pureza dos compostos, com auxílio de placas de cromatografia de camada delgada, foram realizados ensaios in vitro de citotoxicidade pelo método MTT em células J774, seguido da avaliação do potencial leishmanicida na forma promastigota como também, amastigota de Leishmania amazonensis e, por fim, identificou os melhores perfis de seletividade. Em paralelo, a partir da identificação da expressão de macrófagos J774 realizou-se o efeito microbicida para as moléculas MAL2 E MAL3. E assim, verteu-se para a etapa de avaliação das respostas Th1, Th2 e expressão de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Por fim, para conclusão dos testes avaliou-se a partir de ferramentas preditivas a farmacocinética pelo SwissADME; pKCSM e Protox II e o teste de ancoragem molecular com os alvos Tripanotiona redutase (PDB= 2JK6) e 14-α- dismetilase (PDB= 3L4D) utilizando como ferramenta o AutoDock Tools 1.5.6 e em adição a confirmação dos resultados pelo processo de redocking. Como resultados, o perfil citotóxico em macrófagos J774 para a série ACS, variou de 15,76 mM a 31,24 mM, de modo que, apresentaram-se como promissores em relação a análise de citotoxicidade em macrófagos demonstrando que as moléculas não foram tóxicas e possuíam viabilidade celular. Os resultados obtidos a partir da avaliação frente a cepas promastigotas (IC50 = 2,95 - 9,98 mM) e amastigotas (IC50 = 4,00-53,68 mM), sendo assim verificou-se que que a estratégia técnica de substituição por bioisosterismo não clássico reduziu a ação direta sob o patógeno. A série MAL foi elencada para dar seguimento aos estudos em citometria de fluxo devido à baixa citotoxicidade e aumento da expressão de macrófagos, seguido de bom efeito microbicida. Portanto, a viabilidade por citometria de fluxo a partir do marcado Anexina-PI, observou-se que nenhuma das moléculas exibiam perfis citotóxicos frente aos macrófagos J774, corroborando com os resultados obtidos em MTT. Por fim, os estudos relativos ao perfil imunomodulador realizaram-se as análises relativa à expressão de ERNS, EROS e citocinas relacionadas a resposta Th1 e Th2. Obtendo elevada secreção de óxido nítrico e EROs e ainda um perfil imunomodulador a partir do aumento das concentrações de IL2, INF-y e discreta ação por TNF-α seguido da redução das citocinas IL-4 e IL-10, sendo que a MAL 3 demonstrou ser o melhor candidato, pois atuou nas menores concentrações. Por fim, a análise farmacocinética preditiva apresentou perfis farmacocinéticos de absorção, distribuição, metabolismo, toxicidade e excreção, de modo a ser obtido informações que os derivados tiofênicos acrídinicos se apresentaram com adequada absorção no TGI (>93%). No que tange o perfil de interação com enzimas CYP-450 destaca-se a possível interação com CYP2D, uma isoenzima capaz de metabolizar várias classes de fármacos, e por fim, a toxicidade in silico se apresentou de baixa a moderada. Em relação ao método de ancoragem molecular, as moléculas dos derivados acrídinicos apresentaram boas energias de ligação destacando MAL1 com multitarget para as biomacromoléculas avaliadas e a não ativação do receptor endógeno pela MAL3, fortalecendo hipóteses de que esta molécula possui atividade por mecanismo imunomodulatório. Elenca-se a MAL3 como molécula potencial para o tratamento da infecção gerada por L. amazonensis por apresentar os melhores perfis de imunomodulação, apresentando maior índice de seletividade dentre a série MAL. Além disso, os ensaios preditivos in silico apresentou taxa de absorção no TGI >93% e absorção oral tolerável adquirindo perfil druglikeness. Portanto, elenca-se a molécula MAL 3 como potencial lead dos derivados tiofênicos acrídinicos estudados.