Efeito da lectina solúvel em água de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) sobre a oviposição de Aedes aegypti e avaliação da atividade ovicida - SANTOS, Nataly Diniz de Lima (2013)
O mosquito Aedes aegypti é o vetor de três arboviroses denominadas febre Chikungunya, febre amarela e dengue. Esta última é uma das doenças infecciosas mais importantes mudialmente e epidemias de dengue vêm ressurgindo em países tropicais e subtropicais. O controle do vetor é a melhor estratégia de combate à doença. Os inseticidas químicos atualmente utilizados são tóxicos para o meio ambiente e seu uso excessivo tem levado ao desenvolvimento de populações resistentes. Neste cenário, tem aumentado a busca por inseticidas naturais para controle de populações de A. aegypti. Lectinas, proteínas que reconhecem carboidratos, isoladas de plantas apresentam atividade inseticida. A lectina solúvel em água isolada de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) promoveu mortalidade (CL50 de 0,197 mg/mL) contra larvas de A. aegypti no quarto estágio (L4) e extrato das sementes contendo WSMoL retardou o desenvolvimento larval. Uma vez conhecidos os efeitos deletérios de WSMoL sobre as larvas dessa espécie de mosquito, o presente trabalho investigou: 1) o efeito de WSMoL sobre a oviposição de fêmeas grávidas de A. aegypti em condições de laboratório e utilizando ovitrampas (armadilhas para captura de ovos) em ensaios de campo simulado; 2) a eficácia de WSMoL em aumentar a eficiência de armadilhas para captura de fêmeas (MosquiTRAPTM); 3) a atividade ovicida de WSMoL sobre ovos de A. aegypti frescos e estocados; 4) o envolvimento de sensores olfatórios das fêmeas na resposta de oviposição frente a WSMoL; 5) a influência de diferentes doses de radiação gama nos efeitos da lectina sobre larvas, ovos e oviposição. A lectina foi isolada através de protocolo previamente estabelecido. Ensaio de oviposição em laboratório foi realizado em gaiolas (33 x 21 x 30 cm) contendo um par de recipientes de vidro, sendo um deles preenchido com 50 mL do extrato de sementes, fração proteica 0-60% ou WSMoL isolada (concentração final: 0,1 mg/mL de proteínas) e o outro com 50 mL de água destilada (controle negativo). Cada recipiente continha uma peça de papel de filtro como suporte para oviposição. As fêmeas grávidas (25) foram liberadas no interior das gaiolas e após 16 h o número de ovos foi determinado. A eclodibilidade dos ovos depositados pelas fêmeas foi também avaliada. Para isso, 50 ovos foram selecionados e imersos na mesma solução em que foram depositados. Após 144 h, o número de larvas foi registrado. A resposta de oviposição das fêmeas grávidas em condições de campo simulado foi avaliada em uma área experimental localizada no campus da Universidade Federal de Minas Gerais contendo grandes gaiolas (2,5 x 2,5 x 2 m) em seu interior. Em cada gaiola foram colocadas duas ovitrampas contendo palhetas de madeira, uma preenchida com WSMoL (0,1 mg/mL) e outra com água de torneira (controle negativo). Em seguida, 40 fêmeas grávidas previamente selecionadas em laboratório foram liberadas no centro da gaiola. Após 2 h, as ovitrampas foram retiradas e o número de ovos determinado. Ensaios utilizando par de ovitrampas contendo infusão de Panicum maximum (um eficiente estimulante de oviposição) e água destilada foram realizados como controle positivo. Amostra da lectina foi avaliada quanto à presença de compostos voláteis por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS) e ensaio de olfatometria utilizando olfatômetro horizontal de dupla escolha foi realizado para investigar o envolvimento de sensores olfatórios na resposta das fêmeas frente a WSMoL. MosquiTRAP™ (versão 1.0) foi utilizada para avaliar a eficácia de WSMoL como um atraente para captura de fêmeas de A. aegypti em condições de campo simulado. As armadilhas foram preenchidas com WSMoL (teste), infusão de P. maximum (controle positivo) ou água de torneira (controle negativo). Quarenta fêmeas grávidas foram liberadas no centro de cada gaiola contendo um par de armadilhas. O número de fêmeas capturadas foi avaliado após 180 min. A capacidade do extrato de sementes, fração 0-60% e WSMoL em impedir a eclosão de ovos estocados de A. aegypti foi também avaliada. Por fim, foi determinado o efeito da irradiação gama de WSMoL, nas doses de 10 mGy e 10 Gy, sobre as atividades larvicida, ovicida e efeito na oviposição. As preparações brutas (extrato de sementes e fração proteica 0-60%) não afetaram a oviposição de A. aegypti. Diferentemente, WSMoL apresentou significante (p<0,05) efeito estimulante sobre a oviposição tanto em condições de laboratório (73 ± 2,1%) quanto em condições de campo simulado (65 ± 14%) utilizando ovitrampas. O efeito de WSMoL em condições de campo foi similar ao da infusão de P. maximum (67 ± 11 %). Nas ovitrampas contendo WSMoL, o número de ovos presentes na superfície do líquido foi maior que o de ovos depositados na palheta. A presença de compostos voláteis não foi detectada na solução de WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria revelaram que as fêmeas não foram atraídas por WSMoL através de resposta envolvendo sensores olfativos. A não-volatilidade de WSMoL, a presença da maioria dos ovos na superfície do líquido nas ovitrampas contendo WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria indicam que os mecanismos de percepção de WSMoL pelas fêmeas provavelmente envolvem sensores de contato (gustatórios). WSMoL não interferiu na eficiência da armadilha MosquiTRAPTM para captura de fêmeas grávidas, provavelmente devido ao fato de que nesse tipo de armadilha, as fêmeas não podem entrar em contato com a solução. Extrato de sementes, fração proteica 0-60% e WSMoL reduziram a eclosão dos ovos depositados no ensaio de oviposição em condições de laboratório. Extrato, fração e WSMoL também apresentaram atividade ovicida contra ovos estocados, sendo os valores de CE50 (concentração efetiva de proteínas necessária para reduzir em 50% o número de ovos eclodidos) de 0,28, 0,18 e 0,1 mg/mL de proteínas, respectivamente. Análise por microscopia óptica revelou que WSMoL interferiu no desenvolvimento do embrião em ovos frescos, bem como causou a morte dos embriões presentes nos ovos estocados. A irradiação de WSMoL na dose de 10 mGy potencializou as atividades hemaglutinante, larvicida e ovicida da lectina, enquanto o efeito estimulante de oviposição foi abolido. Em conclusão, o presente trabalho relata, pela primeira vez, os efeitos ovicida e estimulante de oviposição de uma lectina e demonstra a atuação de uma molécula fixa (não volátil) como uma pista química utilizada pelas fêmeas grávidas de A. aegypti para seleção do sítio de oviposição. As atividades estimulante de oviposição, ovicida e larvicida de WSMoL fazem desta lectina uma molécula com excelentes características para controle de A. aegypti.