Efeito da associação de antimicrobianos, gene de resistência blaᴋᴘᴄ e genes de virulência na formação do biofilme por isolados de Klebsiella pneumoniae - FREITAS, Catarina Fernandes de (2019)
O tratamento de infecções causadas por Klebsiella pneumoniae representa um problema mundial para o tratamento de infecções adquiridas em ambiente hospitalar, devido a presença de mecanismos de resistência e virulência. Dessa forma, a associação de antimicrobianos tem sido utilizada como alternativa terapêutica. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença do gene de resistência blaᴋᴘᴄ e genes de virulência e a capacidade de isolados clínicos de K. pneumoniae formarem biofilme, avaliar o efeito sinérgico da associação de antimicrobianos, verificar a expressão do gene de resistência blaᴋᴘᴄ e de genes relacionados à formação de biofilme, bem como pesquisar alterações morfológicas na formação de biofilme por isolados produtores de KPC submetidos à ação de antimicrobianos isoladamente e em associação. Foram utilizados 40 isolados clínicos de K. pneumoniae provenientes de dois hospitais públicos de Recife-PE. A confirmação da espécie e o perfil clonal dos isolados foi realizado através da técnica de MALDI-TOF e de ERIC-PCR, respectivamente. Para a detecção do gene de resistência blaᴋᴘᴄ e dos genes de virulência cps, fimH, mrkD, mrkA, ecpA e luxS foi realizada a técnica de PCR. A capacidade da formação de biofilme pelos isolados foi determinada pela técnica de cristal violeta. O sinergismo foi avaliado frente dez isolados selecionados pelo ensaio de Checkerboard. A ação de sub-CIMs de amicacina, polimixina B e meropenem, e a associação destes antimicrobianos na formação de biofilme pelos isolados de K. pneumoniae foi avaliada através das técnicas de cristal violeta e de microscopia eletrônica de varredura. A expressão dos genes blaKPC, fimH, mrkD, ecpA e luxS foi avaliada pela técnica de RT-PCR. Todos os isolados pertenciam a espécie K. pneumoaniae. Foi observado uma heterogeneidade genética entre os isolados de K. pneumoniae, entretanto foram detectados três grupos com similaridade acima de 96%, sendo dois no mesmo hospital e um deles em hospitais distintos, indicando uma disseminação inter-hospitalar. Foi verificado que dentre os isolados analisados 45% (18/40) foram portadores do gene blaᴋᴘᴄ₋₂, estes isolados apresentaram maior frequência dos genes de virulência indicando uma forte relação com a formação de biofilme. Dos 40 isolados, 38 formaram biofilme, sendo a maioria classificados como fortes formadores. Ambas associações de antimicrobianos apresentaram um efeito sinérgico ou aditivo frente dez isolados portadores do gene blaᴋᴘᴄ₋₂ analisados. As concentrações sub-CIMs dos antimicrobianos sozinhos e em combinação interferiram na expressão dos genes fimH e mrkD, além de causar diferentes alterações morfológicas nos biofilmes formados, como variação na quantidade de células aderidas e de matriz extracelular produzida, além da presença de células alongadas ou arredondadas, indicando injúria celular. Estes resultados demonstram uma relação entre a presença dos genes de virulência pesquisados e a formação de biofilme, que sob a ação de concentrações sub-CIMs dos antimicrobianos e associações podem alterar a expressão dos genes estudados e causar modificações morfológicas no biofilme produzido pelos isolados de K. pneumoniae.