Expressão de proteínas quiméricas contendo epítopos NS1 do vírus da dengue para fins diagnósticos e vacinais - PURIFICAÇÃO JUNIOR, Antonio Fernando da (2017)
A dengue é uma importante doença de aspecto emergente e um grande desafio para a saúde pública mundial. No mercado, existe apenas uma vacina licenciada que não é totalmente eficaz na prevenção da doença. Também existem dificuldades para se expressar antígenos virais em sistemas procarióticos para uso no diagnóstico sorológico. O presente estudo, por meio da engenharia de proteínas, propõe moléculas alternativas de interesse diagnóstico e/ou vacinal para a dengue. Com o uso de ferramentas computacionais seguindo a estratégia “epitope-scaffolding”, elementos estruturais da NS1 de dengue (epitope) foram transplantados para a TOP7 (scaffold). Os genes sintéticos para as variantes dessa proteína, levando em consideração os 4 sorotipos de dengue, totalizando 4 proteínas recombinantes, foram otimizados, sintetizados comercialmente e clonados em vetor de expressão. As proteínas recombinantes tiveram sua expressão confirmada por ensaios de imunoblot e purificadas por cromatografia de afinidade, apresentando alto rendimento e solubilidade. Foram realizados ELISAs, com soros de pacientes infectados com DENV-3, para avaliação imunológica das proteínas quiméricas expressas. Os sinais detectados para as quimeras sugerem que elas são potencialmente imunogênicas.