Desenvolvimento de duas plataformas biotecnológicas baseadas em Pichia pastoris e Leishmania tarentolae para produção de candidatos vacinais contra os Papilomavírus humano (HPV) e bovino (BPV) - MARIZ, Filipe Colaço (2016)
O Papilomavírus (PV) é um reconhecido agente de lesões hiperproliferativas benignas que, sob determinadas circunstâncias, podem evoluir para lesões cancerosas. Em humanos, o HPV está relacionado ao desenvolvimento do câncer cervical e anogenital, enquanto o BPV é o agente de cânceres em bovinos e equinos. Atualmente, duas vacinas estão licenciadas para profilaxia contra o HPV, as quais se baseiam em partículas semelhantes ao vírus (VLPs, virus-like particles) obtidas a partir da produção da proteína L1 em sistemas de expressão heteróloga. Apesar de comprovadamente eficazes, ambas as vacinas apresentam importantes limitações relacionadas ao baixo espectro de proteção e elevado custo, o que impede sua implementação sobretudo nos países em desenvolvimento. Neste trabalho, apresentamos o desenvolvimento de duas plataformas biotecnológicas para produção de candidatos vacinais contra o HPV e BPV. Uma das plataformas emprega um sistema genético baseado no promotor constitutivo do gene PGK1 da levedura Pichia pastoris para expressão intracelular da proteína L1 de HPV16. Em paralelo, diferentes candidatos vacinais do HPV e BPV foram desenvolvidos para expressão em Leishmania tarentolae através do emprego de distintos sistemas genéticos. As análises de expressão por dot blotting e western blotting com anticorpos monoclonais demonstram a presença dos candidatos vacinais no lisado das leveduras recombinantes, enquanto evidências obtidas por microscopia eletrônica de transmissão sugerem a formação de VLPs no citoplasma dos clones cultivados. Em contrapartida, as análises por ultracentrifugação e purificação com resina de heparina-sepharose evidenciaram a formação de capsômeros e VLPs quiméricas a partir dos candidatos vacinais produzidos em L. tarentolae. Interessantemente, nossos ensaios apresentam evidências de uma modificação pós-traducional ainda não revelada em espécies de Leishmania, denominada SUMOilação. Demonstramos por diferentes abordagens que tal modificação, ao ser realizada na proteína L2, ocorre através de um padrão semelhante ao descrito em células de mamíferos. Futuros ensaios focarão na determinação dos níveis de produção a partir de cultivos em biorreator e na imunogenicidade de candidatos vacinais desenvolvidos. Esses resultados demonstram a viabilidade do emprego de P. pastoris e L. tarentolae como plataforma vacinal para o desenvolvimento de abordagens potencialmente mais econômicas e de largo espectro contra a papilomatose humana e animal.