Investigação das atividades biológicas de Aspergillus sp. - SANTANA, Raphael Carlos Ferrer de (2019)
Os fungos filamentosos são fontes de diversos compostos bioativos com aplicações nas indústrias farmacêutica, alimentícia, de materiais e na agricultura. Com isso, o objetivo deste trabalho é avaliar o potencial enzimático, antioxidativo e inseticida do complexo bioativo excretado por Aspergillus sp. Como seguimento desse estudo, foi realizado um ensaio de degradação, no qual foi analisada a produção das enzimas quitinases, xilanases e amilases. Visando otimizar a produção do complexo enzimático, realizou-se um planejamento fatorial 2² do tipo delineamento composto central rotacional (DCCR), sendo as variáveis concentração da farinha de camarão e rotação. Posteriormente, realizou-se a análise estatística das variáveis e a análise da variância (ANOVA) dos resultados obtidos utilizando o programa Statistica, versão 8.0 (StatSoft Co., USA). Seguidamente foi realizado um fracionamento do extrato bruto e realizadas as atividades de antioxidante das frações utilizando os ensaios de ABTS e DPPH; ensaios de fumigação, toxicidade por contato e por ingestão do composto bioativo produzido da fermentação do microrganismo, além da identificação do composto majoritário cromatografia gasosa acoplada com espectrometria de massa (GC-MS).No presente estudo foi realizada a identificação do microrganismo pela técnica de MALDI-TOF MS. Inicialmente foi realizada seleção com 72 fungos, dos quais 8 (11,11%) isolados apresentaram atividade para as enzimas quitinases, amilases e xilanases. Dentre as linhagens estudadas, a 98 apresentou um rápido crescimento e um melhor tempo de produção enzimática. Na avaliação do efeito do tempo de incubação, para produção do halo de degradação, a linhagem 98 produziu 5,646 U/mL de quitinase em 24 h, 4,777 U/mL em de Xilanase em 72h e 3,575 U/mL de Amilase em 48h. Em seguida foi escolhida a enzima quitinase para a realização do planejamento fatorial 2² ,sendo estudadas as variáveis concentração da farinha de camarão (2%, 2,18%, 2,5%, 2,82% e 3%) e rotação (0; 29,5; 50; 70,5 e 100 rpm) estudadas. O melhor resultado no procedimento de otimização da atividade quitinolítica foi obtido no ensaio 7 com concentração da farinha de camarão a 2,5 % em condição estática, com valores de atividades 0,4869 U/mL e 0,7016 U/ mg de proteína, respectivamente. No ensaio de toxicidade de ingestão mostrou-se que os insetos Sitophilus zeamais consumiram o alimento, porém o composto bioativo não induziu a mortalidade e sim à repelência com índice de deterrência moderado a forte. A linhagem produtora do complexo bioativo, foi identificada como sendo a espécie identificada como Aspergillus fumigatus. Ensaios de atividade antioxidante, da fração 22, revelaram que o extrato em acetato de etila apresentou boa atividade utilizando DPPH como substrato, com CI50 6,03 ± 0,02 μg de extrato enquanto que o ácido ascórbico obteve CI 50 ± 1,06 μg. Utilizando o método de ABTS , também foi possível detectar uma excelente atividade antioxidante com o extrato acetato de etila obtido do líquido metabólito de Aspergillus fumigatus isolado de água mineral obtendo-se valores de CI50 0,164 ± 0,01 μg/mL e 1,24 vezes superior ao CI 50 0,204 ± 0,02 μg/mL do padrão Trolox. Posteriormente, a fração 22 foi submetida ao CG-MS e o ácido linoleico identificado como o composto majoritário (32,28%).