Desenvolvimento racional de métodos bioanalíticos por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas - CASTELO BRANCO, Daniel da Mota (2015)
No âmbito da bioanálise, frequentemente é requerido o desenvolvimento de métodos bioanalíticos seletivos e sensíveis. Atualmente, a técnica mais amplamente utilizada para quantificar compostos em matrizes biológicas é a cromatografia líquida associada à espectrometria de massas em série (CLAE-EM/EM) por reunir as características de alta seletividade e alta sensibilidade, além de proporcionar métodos com tempo de análise relativamente curto. Porém, a abordagem usualmente utilizada no desenvolvimento de métodos por CLAE-EM/EM é a de “tentativa e erro”, elevando o custo do processo. Em contrapartida, a técnica de planejamento de experimentos aliada à metodologia de superfície de resposta oferece uma maneira eficiente de conduzir os experimentos e, assim, obter mais informações sobre a relação entre os diversos fatores e as respostas do sistema de CLAE-EM/EM. O objetivo deste estudo foi desenvolver um procedimento sistemático, utilizando as técnicas de planejamento experimental e superfície de resposta, visando à obtenção de métodos bioanalíticos por CLAE-EM/EM de uma forma eficiente. O procedimento proposto foi aplicado no desenvolvimento de um método bioanalítico modelo para quantificação de olanzapina (OLZ) e quetiapina (QTP) em plasma humano, utilizando a venlafaxina (VLX) como padrão interno. O método obtido foi composto de uma coluna HILIC 100 x 2,1 mm, 2,6 μm Phenomenex®, fase móvel acetonitrila (ACN):formato de amônio 10 mmol/L (85,5:14,5), fluxo 0,2 mL/min, além de um espectrômetro de massas triplo quadrupolo no modo MRM monitorando as transições (MRM) 313>256 (OLZ), 384>253 (QTP) e 278>260 (VLX). O método desenvolvido apresentou a total separação cromatográfica dos picos da olanzapina, quetiapina e venlafaxina, além de um incremento médio de área para os analitos de aproximadamente 50% em comparação com a metodologia de otimização univariada, tradicionalmente empregada. Além disso, foi desenvolvido um método de extração líquido-líquido com uma eficiência de processo superior a 70% para todos os fármacos.