Avaliação dos mecanismos de ação envolvidos no efeito anti- inflamatório da LQB 118 - Lima, Éssia de Almeida (2023)
A LQB 118 é uma molécula híbrida sintética pertencente ao grupo das pterocarpanoquinonas, tendo sua estrutura baseada em dois grupos de moléculas naturais bioativas, as naftoquinonas e os pterocarpanos. O papel imunomodulador da LQB 118 vem sendo demonstrado pelo nosso grupo de pesquisa, no entanto, os mecanismos de ação envolvidos ainda não estão totalmente elucidados. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar os mecanismos envolvidos na atividade anti-inflamatória da LQB 118 in vitro e in vivo. Inicialmente, para os experimentos in vitro, camundongos Swiss receberam uma injeção intraperitoneal (i.p.) de tioglicolato (4%). Após quatro dias, os macrófagos peritoneais foram cultivados na concentração de 2x105, 5x105 ou 1,5x106 cels/poço. As células foram tratadas com a LQB 118 (0.1 μM, 0.5 μM, 1 μM ou 5 μM) na presença ou ausência do estímulo inflamatório, zimosan (0,2 mg/mL), por 40 min ou 24h. Em seguida, os sobrenadantes foram recolhidos para a quantificação das citocinas IL-10 e IL- 12 por ELISA e do NO pelo reagente de Griess. Além disso, a atividade fagocítica às partículas de zimosan também foi quantificada. Por fim, para analisar o mecanismo de ação da molécula, as células foram incubadas com os anticorpos anti-iNOS, anti-NFκB, anti-P-NFκB, anti-P-Akt, anti-P-mTOR, CellRox Green e com partículas de zimosan fluorescentes e analisadas por citometria de fluxo. O zimosan induziu aumento das citocinas e do óxido nítrico e o tratamento com a LQB 118 foi capaz de reduzir os níveis de IL-12 (0.1 μM em 28,7%; 0.5 μM em 31%; 1 μM em 36,8% e 5 μM em 57,6%) e do NO (5 μM em 60,2%), sem interferir nos níveis de IL-10. Além disso, a LQB 118 modulou negativamente a expressão do NFκB total (21,7%) e fosforilado (59,4%), reduziu a capacidade fagocítica dos macrófagos peritoneais (24,1% na placa e 64,4% por citometria de fluxo), a produção de ROS (23,5%), além de reduzir os níveis de mTOR fosforilado (20,2%). Adicionalmente, foi avaliado o efeito da LQB 118 in vivo, em modelo de peritonite induzida por zimosan. Para isso, camundongos Swiss foram tratados via i.p. com a LQB 118 nas doses de 10 ou 20 mg/kg. Uma hora após o tratamento, foram estimulados com zimosan (2 mg/mL) de modo a induzir uma inflamação no peritônio. Após 4h o lavado peritoneal foi coletado e utilizado para contagem total e diferencial de células por microscopia óptica, para a quantificação das citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10 por ELISA e para análise da expressão da MAP quinase p38 por citometria de fluxo. O zimosan, como esperado, induziu aumento da migração de células, dos níveis das citocinas e da fosforilação da p38. O tratamento com a LQB 118, por sua vez, foi capaz de reduzir o número total de células na cavidade peritoneal (32,6% na dose de 10 mg/kg ou 51,1% na dose 20 mg/kg) pela redução na migração das células polimorfonucleares (56,7% para 10 mg/kg ou 80,4% para 20 mg/kg). Além disso, essa molécula foi capaz de reduzir os níveis das citocinas IL-1β (81,1% ou 78,3% para as doses de 10 mg/kg ou 20 mg/kg, respectivamente), TNF-α (56,2% na dose de 20 mg/kg) e IL-10 (71,6% na dose de 20 mg/kg) e de modular negativamente a fosforilação da p38 induzida por zimosan (51,6%). Dessa forma, esses dados demonstram os mecanismos envolvidos na atividade anti-inflamatória da LQB 118 e contribuem para o entendimento das potencialidades dessa substância em atuar em processos fisiológicos da inflamação.