Isolamento, caracterização morfológica e molecular de bactérias endofíticas e epifíticas em espécies de Bromeliaceae de bancadas lateríticas, Corumbá, Mato Grosso do Sul - Viana, Thianny Fernanda Carrelo (2016)
A associação de bactérias com plantas é amplamente estudada em diferentes ambientes, principalmente com plantas cultivadas. Porém, é necessário expandir os estudos para a associação de bactérias com plantas silvestres. Os objetivos do presente trabalho foram isolar, caracterizar e identificar bactérias associadas a bromélias de cangas, e correlacionar a diversidade de bactérias com as diferentes espécies de plantas, com as características do solo e com as diferentes populações amostradas. Foi realizada a coleta de raízes de Dyckia excelsa, Dyckia leptostachya e Deuterocohnia meziana em três locais distintos: Fazenda São João, Parque Municipal de Piraputangas, e Sítio Arqueológico Lajedo, em Corumbá, Mato Grosso do Sul, Brasil. Para contagem e isolamento das bactérias epifíticas, as raízes foram imersas em tampão PBS e agitadas a 100 rpm. As bactérias endofíticas foram contadas e isoladas após a desinfecção superficial dos tecidos, que foram triturados em tampão PBS e submetidos à agitação de 150 rpm. As amostras foram diluídas em tampão PBS e semeadas em meio TSA 4% e incubadas a 28 ºC. A caracterização morfológica baseou-se na forma, borda, brilho, elevação, cor e tamanho, que foram utilizados para análise de agrupamento. A análise de BOX-PCR consistiu na amplificação das regiões boxA. Isolados representativos de cada padrão de banda e os que não tiveram seu DNA amplificado pela técnica de BOX-PCR, tiveram a região 16S rDNA sequenciada. A árvore filogenética foi construída utilizando o programa MEGA6 com o método Neighbor-Joining. Foram feitas análises de correlação para verificar a biodiversidade com as características do solo, com as espécies vegetais e com o tamanho das ilhas de solo. Os resultados das características morfológicas mostraram que existe alta diversidade fenotípica em sistemas radiculares que foi confirmada através da técnica de BOX-PCR, a qual mostrou variabilidade intragenérica e intraespecífica nas bactérias isoladas das bromélias. Os resultados do sequenciamento da subunidade 16S rRNA mostraram que o gênero Bacillus (54%) foi o mais representativo dentre as sequências obtidas, seguido pelo gênero Alcaligenes, Lysinibacillus e Paenibacillus. Foi observada uma correlação positiva da biodiversidade bacteriana com algumas características físico-químicas do solo: ferro, fósforo e argila. O índice de Shannon-Wiener mostrou que existe uma diversidade moderada de bactérias de acordo com as populações de bromélias amostradas. Um grande número de bactérias identificadas com o gênero Bacillus é encontrado em ambientes semelhantes a cangas, pois este gênero possui adaptações para sobrevivência em ambientes hostis, como a produção de endósporos, capacitando-o para sobreviver em ambientes com mudanças dramáticas de temperatura. Em conclusão as análises de BOX-PCR complementou a técnica de sequenciamento, mostrando uma diversidade intragenérica e intraespecífica entre os isolados.